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扬名声

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
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帖子: 16
在线: 5.7小时
虫号: 1324200
注册: 2011-06-16

[交流] 细胞培养已有1人参与

新手求助：
以下是我拟定的做小鼠白色脂肪原代培养的步骤：
1．取4只6—8周大雄性小鼠，杀死后取其附睾及腹侧处WAT放入PBS中清洗、剪碎
2．放入消化液中 37℃消化45min
消化液：1 mg/ml collagenase, DMEM/Ham’s F-12 1:1 (DMEM/F12), 1%BSA, antibiotics (100 units/ml penicillin, 0.1 mg/ml streptomycin, 2.5 mg/ml fungizone, and 50 mg/ml gentamicin)
3．用150um sterile nylon mesh过滤后250g离心5min
4．弃上清液，用红细胞裂解液重悬沉淀细胞10min
5． 500g离心5min，弃上清液，用培养液重悬沉淀细胞
培养液：DMEM/F12, 10% FCS, and antibiotics
6．用25um sterile nylon mesh过滤，铺板（10cm plate，60000cells/cm2）
想请教各位资深前辈：
1. 为什么第3步离心后看不到沉淀呢？
2. 还有这个步骤有什么不当的地方需要改进吗？
谢谢大家了！

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