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细胞培养 已有1人参与
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新手求助： 以下是我拟定的做小鼠白色脂肪原代培养的步骤： 1． 取4只6—8周大雄性小鼠，杀死后取其附睾及腹侧处WAT放入PBS中清洗、剪碎 2． 放入消化液中 37℃消化45min 消化液：1 mg/ml collagenase, DMEM/Ham’s F-12 1:1 (DMEM/F12), 1%BSA, antibiotics (100 units/ml penicillin, 0.1 mg/ml streptomycin, 2.5 mg/ml fungizone, and 50 mg/ml gentamicin) 3． 用150um sterile nylon mesh过滤后250g离心5min 4． 弃上清液，用红细胞裂解液重悬沉淀细胞10min 5． 500g离心5min，弃上清液，用培养液重悬沉淀细胞 培养液：DMEM/F12, 10% FCS, and antibiotics 6． 用25um sterile nylon mesh过滤，铺板（10cm plate，60000cells/cm2） 想请教各位资深前辈： 1. 为什么第3步离心后看不到沉淀呢？ 2. 还有这个步骤有什么不当的地方需要改进吗？ 谢谢大家了！ |
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