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千凌VV

新虫 (初入文坛)

sytucom: 下次麻烦重新开帖子,否则下次给与屏蔽,多谢您的配合 2015-12-10 11:17:50
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2楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-11-16 11:38:23
1.不知道你的阿拉伯糖标准品是不是被污染了,我们也有过被污染的情况,出来两个峰
2.基线有没有跑平,或者流动相有没有被污染了
3.不清楚你的衍生方法及液相条件,PMP衍生我做过5次了,每次都成功,一般来说标品峰 ...

你好,我最近再做海参多糖,方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生,但是图总的跑的不好,能不能帮我看看找找原因。谢谢
多糖HPLC衍生后结果。。。
海参多糖对照.png

11楼2015-12-02 15:00:14
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qingxiayuan

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
sytucom: 金币+5, 应助指数+1, 辛苦,非搂住的问题,应助+ 1 2015-12-10 11:18:38
引用回帖:
11楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-02 15:00:14
你好,我最近再做海参多糖,方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生,但是图总的跑的不好,能不能帮我看看找找原因。谢谢

海参多糖对照.png
...

15-20分钟应该是PMP的峰吧,不知道你萃取了几次,PMP峰过大了,后面的峰还好啊,响应值也还可以的
12楼2015-12-02 19:11:14
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sty5959596

新虫 (初入文坛)

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11楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-02 15:00:14
你好,我最近再做海参多糖,方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生,但是图总的跑的不好,能不能帮我看看找找原因。谢谢

海参多糖对照.png
...

你这个衍生,是把PMP萃取掉了吗?你的流动相是什么?比例是多少?也是用C18柱跑的吗?

发自小木虫IOS客户端
13楼2015-12-03 07:44:57
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千凌VV

新虫 (初入文坛)

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12楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-02 19:11:14
15-20分钟应该是PMP的峰吧,不知道你萃取了几次,PMP峰过大了,后面的峰还好啊,响应值也还可以的...

方法里对照没有用三氯甲烷萃取,只有样品进行了萃取,还有能不能给我讲一下三氯甲烷萃取的原理和作用?她们一直说三氯甲烷是萃取脂肪或者蛋白质的……谢谢
14楼2015-12-04 08:43:44
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千凌VV

新虫 (初入文坛)

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13楼: Originally posted by sty5959596 at 2015-12-03 07:44:57
你这个衍生,是把PMP萃取掉了吗?你的流动相是什么?比例是多少?也是用C18柱跑的吗?
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我也不太清楚三氯甲烷萃取的是什么?流动相A15%Y乙腈磷酸盐溶液B40%乙腈磷酸盐溶液,柱子就是C18柱,而且我中间没有涡旋,对衍生反应是不是有影响啊?
多糖HPLC衍生后结果。。。-1
流动相比例

15楼2015-12-04 08:50:21
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qingxiayuan

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【答案】应助回帖

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15楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-04 08:50:21
我也不太清楚三氯甲烷萃取的是什么?流动相A15%Y乙腈磷酸盐溶液B40%乙腈磷酸盐溶液,柱子就是C18柱,而且我中间没有涡旋,对衍生反应是不是有影响啊?

流动相比例
...

氯仿萃取的是PMP,我都是涡旋后才反应的。流动相和你的也不一样,不用在线混合乙腈吧,这样很容易有气泡啊。
16楼2015-12-04 11:01:09
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千凌VV

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12楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-02 19:11:14
15-20分钟应该是PMP的峰吧,不知道你萃取了几次,PMP峰过大了,后面的峰还好啊,响应值也还可以的...

对照也要进行萃取吗?那个方法上好像没有要求啊,还是我没有看懂?能不能帮我看看方法
17楼2015-12-04 14:09:16
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千凌VV

新虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-04 11:01:09
氯仿萃取的是PMP,我都是涡旋后才反应的。流动相和你的也不一样,不用在线混合乙腈吧,这样很容易有气泡啊。...

涡旋的时间什么的有具体要求么?我怎么涡旋之后 杂峰更多了?
18楼2015-12-10 11:10:56
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qingxiayuan

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17楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-04 14:09:16
对照也要进行萃取吗?那个方法上好像没有要求啊,还是我没有看懂?能不能帮我看看方法...

我的方法已经在回复里了,不知道你的是怎样的,可以发上来看看
19楼2015-12-10 13:47:52
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千凌VV

新虫 (初入文坛)

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19楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-10 13:47:52
我的方法已经在回复里了,不知道你的是怎样的,可以发上来看看...

酶解好的样品取1ml,到安瓿瓶中,加入4 mol/L三氟乙酸(TFA) 1ml并充氮气封管,110 ℃水解8 h。70 ℃氮气吹干,然后向其中加2ml蒸馏水转移到5ml容量瓶中,用0.3mol/l氢氧化钠调ph为6.5—7.5,然后蒸馏水定容,作衍生化反应使用。
取400ul处理好的样品加入乳糖内标50ul,450ulPMP和450ul0.3mol/l的氢氧化钠(此处我实际操作时都将溶液体积多取了5倍),漩涡混匀后(?),将混合物置于70 ℃水浴中,反应30 min,冷却至室温后,再加450ul的0.3 M HCl,再次涡旋混合均匀,向其中加入1 mL氯仿,混匀后,小心吸取水相,弃氯仿层,萃取过程重复3次以除去PMP,抽提后的水相反应液用0.45 滤膜过滤后HPLC检测。
HPLC检测。条件如下:检测柱,C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 µm;柱温,25℃;流速,l.O mL/min;检测波长,245 nm。流动相A:15%乙腈磷酸盐溶液 B:40%乙腈磷酸盐溶液梯度如图
对照只是加内标,PMP和氢氧化钠,然后涡旋,我现在是涡旋10—15min,然后上液相跑,但是杂峰很多,然后放置2/3个小时情况有所改善,但依然跑不出很好的峰形,方法中没有很精确的说明,所以一直就不知道问题到底出在哪儿
多糖HPLC衍生后结果。。。-2
流动相比例

20楼2015-12-10 16:07:27
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