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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖HPLC衍生后结果。。。
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
sytucom: 下次麻烦重新开帖子，否则下次给与屏蔽，多谢您的配合 2015-12-10 11:17:50
引用回帖:
2楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-11-16 11:38:23
1.不知道你的阿拉伯糖标准品是不是被污染了，我们也有过被污染的情况，出来两个峰
2.基线有没有跑平，或者流动相有没有被污染了
3.不清楚你的衍生方法及液相条件，PMP衍生我做过5次了，每次都成功，一般来说标品峰 ...

你好，我最近再做海参多糖，方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生，但是图总的跑的不好，能不能帮我看看找找原因。谢谢
多糖HPLC衍生后结果。。。
海参多糖对照.png
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11楼2015-12-02 15:00:14
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
sytucom: 金币+5, 应助指数+1, 辛苦，非搂住的问题，应助+ 1 2015-12-10 11:18:38
引用回帖:
11楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-02 15:00:14
你好，我最近再做海参多糖，方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生，但是图总的跑的不好，能不能帮我看看找找原因。谢谢

海参多糖对照.png
...

15-20分钟应该是PMP的峰吧，不知道你萃取了几次，PMP峰过大了，后面的峰还好啊，响应值也还可以的
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12楼2015-12-02 19:11:14
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sty5959596

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-02 15:00:14
你好，我最近再做海参多糖，方法是【SCT 3049-2015 刺参及其制品中海参多糖】原理也是PMP的柱前衍生，但是图总的跑的不好，能不能帮我看看找找原因。谢谢

海参多糖对照.png
...

你这个衍生，是把PMP萃取掉了吗？你的流动相是什么？比例是多少？也是用C18柱跑的吗？

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13楼2015-12-03 07:44:57
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
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12楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-02 19:11:14
15-20分钟应该是PMP的峰吧，不知道你萃取了几次，PMP峰过大了，后面的峰还好啊，响应值也还可以的...

方法里对照没有用三氯甲烷萃取，只有样品进行了萃取，还有能不能给我讲一下三氯甲烷萃取的原理和作用？她们一直说三氯甲烷是萃取脂肪或者蛋白质的……谢谢
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14楼2015-12-04 08:43:44
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by sty5959596 at 2015-12-03 07:44:57
你这个衍生，是把PMP萃取掉了吗？你的流动相是什么？比例是多少？也是用C18柱跑的吗？
...

我也不太清楚三氯甲烷萃取的是什么？流动相A15%Y乙腈磷酸盐溶液B40%乙腈磷酸盐溶液，柱子就是C18柱，而且我中间没有涡旋，对衍生反应是不是有影响啊？
多糖HPLC衍生后结果。。。-1
流动相比例
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15楼2015-12-04 08:50:21
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-04 08:50:21
我也不太清楚三氯甲烷萃取的是什么？流动相A15%Y乙腈磷酸盐溶液B40%乙腈磷酸盐溶液，柱子就是C18柱，而且我中间没有涡旋，对衍生反应是不是有影响啊？

流动相比例
...

氯仿萃取的是PMP，我都是涡旋后才反应的。流动相和你的也不一样，不用在线混合乙腈吧，这样很容易有气泡啊。
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16楼2015-12-04 11:01:09
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
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12楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-02 19:11:14
15-20分钟应该是PMP的峰吧，不知道你萃取了几次，PMP峰过大了，后面的峰还好啊，响应值也还可以的...

对照也要进行萃取吗？那个方法上好像没有要求啊，还是我没有看懂？能不能帮我看看方法
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17楼2015-12-04 14:09:16
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-04 11:01:09
氯仿萃取的是PMP，我都是涡旋后才反应的。流动相和你的也不一样，不用在线混合乙腈吧，这样很容易有气泡啊。...

涡旋的时间什么的有具体要求么？我怎么涡旋之后 杂峰更多了？
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18楼2015-12-10 11:10:56
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)
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17楼: Originally posted by 千凌VV at 2015-12-04 14:09:16
对照也要进行萃取吗？那个方法上好像没有要求啊，还是我没有看懂？能不能帮我看看方法...

我的方法已经在回复里了，不知道你的是怎样的，可以发上来看看
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19楼2015-12-10 13:47:52
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千凌VV

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by qingxiayuan at 2015-12-10 13:47:52
我的方法已经在回复里了，不知道你的是怎样的，可以发上来看看...

酶解好的样品取1ml，到安瓿瓶中,加入4 mol/L三氟乙酸(TFA) 1ml并充氮气封管，110 ℃水解8 h。70 ℃氮气吹干，然后向其中加2ml蒸馏水转移到5ml容量瓶中，用0.3mol/l氢氧化钠调ph为6.5—7.5，然后蒸馏水定容，作衍生化反应使用。
取400ul处理好的样品加入乳糖内标50ul，450ulPMP和450ul0.3mol/l的氢氧化钠（此处我实际操作时都将溶液体积多取了5倍），漩涡混匀后（？），将混合物置于70 ℃水浴中,反应30 min,冷却至室温后,再加450ul的0.3 M HCl，再次涡旋混合均匀,向其中加入1 mL氯仿,混匀后,小心吸取水相，弃氯仿层,萃取过程重复3次以除去PMP,抽提后的水相反应液用0.45 滤膜过滤后HPLC检测。
HPLC检测。条件如下:检测柱,C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 µm；柱温,25℃；流速，l.O mL/min；检测波长,245 nm。流动相A：15%乙腈磷酸盐溶液 B：40%乙腈磷酸盐溶液梯度如图
对照只是加内标，PMP和氢氧化钠，然后涡旋，我现在是涡旋10—15min，然后上液相跑，但是杂峰很多，然后放置2/3个小时情况有所改善，但依然跑不出很好的峰形，方法中没有很精确的说明，所以一直就不知道问题到底出在哪儿
多糖HPLC衍生后结果。。。-2
流动相比例
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20楼2015-12-10 16:07:27
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