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soutree

木虫 (正式写手)

[求助] 植物转基因是否一定得加标签? 标签会不会对蛋白有影响? 已有1人参与

目前在做转基因,非模式,用pBI121载体,未经改造,打算做一个融合GUS的,但是,怕GUS蛋白过大,有影响,所以想做一个不带标签非融合的。
  结果有同学说,做转基因必须带标签,不带标签不方便在蛋白水平检测。
  想了解一下,做转基因必须要带标签,必须要在蛋白水平检测么? 如果不带标签,只用定量,southern在转录以及DNA水平验证,对发论文会有多大影响?

因为目前实验室的植物表达载体,暂时没有只有GFP的载体,只有带GFP瞬时表达载体,因为可以用GFP做标签,是否可以做长期转基因验证?
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flylongxiang

铁虫 (初入文坛)

GFP之前有人提到过,互补突变体不成功的。其实,通常都是用FLAG HA MYC这一类的标签。蛋白过大,肯定是不好的。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-13 23:01:57
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Brinster1

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
soutree: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 我觉得,连标签也是有必要的...最后还是连了 2016-01-07 16:36:26
我也用这个载体,我个人认为:1带标签确实方便检测,但是容易对转基因或是表达造成影响;2GUS方便杂交,但GUS蛋白增加能说明你的目的基因蛋白增加么,肯定不能,我们就发现GUS蛋白表达量增加了,但是目的基因蛋白表达量减少了,原因很简单,我们的蛋白处于分解阶段。所以我个人认为,可以不连标签,如确有必要检测目的基因蛋白的话那么做抗体吧
3楼2015-11-14 12:28:25
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guanhr515

新虫 (初入文坛)

亲,我现在也想构建重组载体,可是我的pbi121质粒有问题,亲,可以接我一点点质粒或者菌液,如若提供。不胜感激,货到付款

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-06 11:18:35
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