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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教wb检测磷酸化蛋白
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hofo336699

银虫 (正式写手)

[求助] 请教wb检测磷酸化蛋白 已有1人参与

小弟最近做一个磷酸化蛋白的wb，怎么都得不到清晰的条带，请高人看看，应该怎么样调整，一抗1:1000和1：800都试过，二抗是1：5000，洗膜洗了很久，都是这个样子，应该不是洗膜的问题

请教wb检测磷酸化蛋白
20151104_1534_8_副本_副本.jpg
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懒虫啊！
1楼 2015-11-09 21:39:41
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free_zi

金虫 (著名写手)
同问，磷酸化很难做，需要新鲜样品提取蛋白，并且需加抑制剂。这个抗体是商业的吗？与底物反应有人做吗?

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-06-10 18:52:09
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darkarrow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hofo336699: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-13 00:41:05
最好用BSA做封闭，尤其是tyrosine phosphorylation
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2楼2015-12-10 15:32:14
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z1211818

银虫 (正式写手)
楼主问题解决了吗？最近也需要做磷酸化的蛋白检测WB，不知道如何下手，感觉磷酸化的蛋白更易降解或磷酸化结构遭到破坏。
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3楼2016-05-31 12:43:39
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