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zcqh27木虫 (正式写手)
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[求助]
大肠杆菌基因工程菌冻干菌种的培养与蛋白表达 已有2人参与
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我有一株含有PET质粒的BL21DE3大肠杆菌，用于蛋白表达。菌种稳定性较好，甘油保藏的菌种表达非常稳定。为了更好的保藏这个菌种，我将活化的菌种低速低温离心后，用10%脱脂牛奶重悬，并分装到无菌安瓿管中，预冻，冻干后，抽真空，并火焰封口，液氮保藏。 刚刚制备的安瓿管做过验证，表达量还可以，但是放置了几个月后，在做摇瓶验证，就没有表达了，同步用甘油保藏的菌种表达没问题。 冻干的菌种依然有相应的抗性，抽提质粒测序，目的基因也正常。 因此，实在不清楚这是为什么，怀疑是不是菌种保藏方法的原因，但是目的基因正常，却没表达，这实在不知如何解释。希望有高人指点一下。不胜感激。 |
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