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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌基因工程菌冻干菌种的培养与蛋白表达
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zcqh27

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌基因工程菌冻干菌种的培养与蛋白表达 已有2人参与

我有一株含有PET质粒的BL21DE3大肠杆菌，用于蛋白表达。菌种稳定性较好，甘油保藏的菌种表达非常稳定。为了更好的保藏这个菌种，我将活化的菌种低速低温离心后，用10%脱脂牛奶重悬，并分装到无菌安瓿管中，预冻，冻干后，抽真空，并火焰封口，液氮保藏。
刚刚制备的安瓿管做过验证，表达量还可以，但是放置了几个月后，在做摇瓶验证，就没有表达了，同步用甘油保藏的菌种表达没问题。
冻干的菌种依然有相应的抗性，抽提质粒测序，目的基因也正常。
因此，实在不清楚这是为什么，怀疑是不是菌种保藏方法的原因，但是目的基因正常，却没表达，这实在不知如何解释。希望有高人指点一下。不胜感激。
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1楼 2015-11-09 09:31:48
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无涯的爱

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
zcqh27: 金币+1, ★有帮助, 培养基没变，都是OXOID的 2015-11-17 16:09:16
培养基成分有不有改变，尤其是氮源（不同厂家的东西），有的企业的氮源会有这样的影响
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2楼2015-11-12 14:12:09
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
zcqh27: 金币+2, ★有帮助, 我同步做的冻干和甘油保藏，甘油的菌种没问题，冻干的提质粒测序也没问题，就是没有表达了。也活化过，活化了两代还是不行。 2015-11-17 16:16:08
1.培养基的问题，培养基成分是否一致，成分是否变质。
2.原核蛋白表达不出来可能就是菌的问题，一般由冷冻干燥保藏的菌，处于休眠状态，需要2-3代恢复活力。
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
3楼2015-11-12 14:36:20
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