应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌基因工程菌冻干菌种的培养与蛋白表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 1359  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zcqh27

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌基因工程菌冻干菌种的培养与蛋白表达 已有2人参与

我有一株含有PET质粒的BL21DE3大肠杆菌，用于蛋白表达。菌种稳定性较好，甘油保藏的菌种表达非常稳定。为了更好的保藏这个菌种，我将活化的菌种低速低温离心后，用10%脱脂牛奶重悬，并分装到无菌安瓿管中，预冻，冻干后，抽真空，并火焰封口，液氮保藏。
刚刚制备的安瓿管做过验证，表达量还可以，但是放置了几个月后，在做摇瓶验证，就没有表达了，同步用甘油保藏的菌种表达没问题。
冻干的菌种依然有相应的抗性，抽提质粒测序，目的基因也正常。
因此，实在不清楚这是为什么，怀疑是不是菌种保藏方法的原因，但是目的基因正常，却没表达，这实在不知如何解释。希望有高人指点一下。不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-09 09:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无涯的爱

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
zcqh27: 金币+1, ★有帮助, 培养基没变，都是OXOID的 2015-11-17 16:09:16
培养基成分有不有改变，尤其是氮源（不同厂家的东西），有的企业的氮源会有这样的影响
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-12 14:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
zcqh27: 金币+2, ★有帮助, 我同步做的冻干和甘油保藏，甘油的菌种没问题，冻干的提质粒测序也没问题，就是没有表达了。也活化过，活化了两代还是不行。 2015-11-17 16:16:08
1.培养基的问题，培养基成分是否一致，成分是否变质。
2.原核蛋白表达不出来可能就是菌的问题，一般由冷冻干燥保藏的菌，处于休眠状态，需要2-3代恢复活力。
赞一下 回复此楼
我好累，承受这个年纪不该有的帅！
3楼2015-11-12 14:36:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zcqh27 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学279求调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-04-08 10/500 2026-04-08 20:19 by 逆水乘风
[考研] 材料类284调剂 +11 想换手机不想解� 2026-04-08 13/650 2026-04-08 20:09 by -迷了路啊路
[考研] 材料工程322 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-08 16:35 by luoyongfeng
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +20 努力奋斗112 2026-04-07 21/1050 2026-04-08 14:54 by screening
[考研] 302分求调剂 +3 凡语祈愿 2026-04-08 4/200 2026-04-08 14:24 by zhq0425
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考博] 申博 +8 IQwQl 2026-04-04 8/400 2026-04-08 09:43 by 0608104024
[考研] 考研调剂 +7 15615482637 2026-04-04 7/350 2026-04-06 22:56 by chenzhimin
[考研] 考研调剂 +3 Wwwwwww哇 2026-04-06 3/150 2026-04-06 20:55 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +12 ykyhsa 2026-04-05 14/700 2026-04-06 17:46 by fuyu_
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 315求调剂 +5 ＆123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 320求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:40 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭