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贝扎新

新虫 (初入文坛)

[求助] Bp反应后有目的带的载体自身大小不一致 已有1人参与

如题,用三个不同基因编号5,6,7 分别为880bp, 1.1k 1.1k 与入门载体pDORN207进行bp反应后电转涂皿挑菌抽质粒,用扩基因的特异引物对质粒进行pcr后发现有许多载体上面已经重装上了我的目的基因,但是载体带大小不一致呀,条带特别凌乱。本人是新手小白,急求各位大牛相助!!

而且之后将一个已经测序成功的有连上目的基因的入门载体转化希望扩大,同一个平板上挑了4个菌,用载体引物扩后显示均有目的带,但是载体带又开始大小不一致,,感觉最近对载体的大小有些凌乱,希望各位有经验的大牛不令赐教!
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物特异性不足,检查一下,有没有可能在允许几个碱基错配的前提下结合到pDNOR207.我个人觉得对于Gateway产物。
最好的验证方法还是做酶切+测序
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2015-11-09 05:17:10
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