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yuyixst

木虫 (正式写手)

[交流] 荧光定量PCR的高手请帮帮忙?

小虫用荧光定量PCR进行基因分型,在ABI7500上面的图形都很漂亮,可就是荧光信号很低,优化了体系,尝试了各种TM值,重新设计了好几对上下游引物(因为感觉上探针是已经定死了,况且在目前看来这个探针是最特异的了),虽然都能够达到分型的目的,但就是无法改变信号低的问题。期间,怀疑过我的引物的错配,做了常规PCR,电泳,sybgreen,都没有非特异性扩增,于是怀疑是否探针的问题,请高手解答,小虫快郁闷死了,快救救我,不然小虫要分泌点消化酶之类的把自己给降解算了。!!!!!!!!!!!!!!!........
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xipha

木虫 (正式写手)

模板呢,模板能否不能多加点?
2楼2008-09-11 22:29:50
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yuyixst

木虫 (正式写手)

从引物、模板,镁离子,到探针浓度都试了N次,荧光信号也没有得到实质的提高
3楼2008-09-12 08:05:15
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boouy

银虫 (正式写手)

和housekeeping基因的丰度比较,如果相对丰度很低的话只有增加模板了。
4楼2008-09-12 10:17:35
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