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了了5123

金虫 (小有名气)

[求助] 手提M13噬菌体DNA时,怎么能更好地提高产率? 已有1人参与

因为没有用试剂盒提取M13噬菌体单链DNA,所以有好几条杂带,初步判断有可能是含有宿主菌DNA,恳请大神们帮助怎样更好地除去宿主菌,以及提高M13产量?
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:30:42
离心取上清,然后用PEG和NaCl沉淀,按道理说不会有宿主DNA啊?

是不是离心时候太猛了?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2015-11-05 10:03:02
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了了5123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-11-05 10:03:02
离心取上清,然后用PEG和NaCl沉淀,按道理说不会有宿主DNA啊?

是不是离心时候太猛了?

是 我是PEG NaCl沉淀的,按照分子克隆指南做的,开始是8000rpm 4℃ 15min,取上清然后加PEG NaCl,12000rpm 4℃ 10min 这个有什么不妥吗?
3楼2015-11-05 10:35:49
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:31:10
了了5123: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-11-06 11:12:31
PEG, NaCl要缓慢分批加入,逐步搅拌,然后离心的时候你看到试管底部有白色的点点了吗?
行至水穷处,坐看云起时
4楼2015-11-05 11:42:18
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了了5123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2015-11-05 11:42:18
PEG, NaCl要缓慢分批加入,逐步搅拌,然后离心的时候你看到试管底部有白色的点点了吗?

PEG,NaCl是要分批加入吗?受教了。这样的目的是能让DNA更好地沉淀吗?我后来离心的时候一般情况下可以看到白色的沉淀,有时候多,有时候少,我提了好久的M13ssDNA了,感觉每次提的都会有宿主菌DNA,这个沉淀多少能说明问题吗?
5楼2015-11-05 14:51:07
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