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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 手提M13噬菌体DNA时，怎么能更好地提高产率？
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了了5123

金虫 (小有名气)

[求助] 手提M13噬菌体DNA时，怎么能更好地提高产率？ 已有1人参与

因为没有用试剂盒提取M13噬菌体单链DNA，所以有好几条杂带，初步判断有可能是含有宿主菌DNA，恳请大神们帮助怎样更好地除去宿主菌，以及提高M13产量？
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1楼 2015-11-05 09:29:24
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:30:42
离心取上清，然后用PEG和NaCl沉淀，按道理说不会有宿主DNA啊？

是不是离心时候太猛了？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-11-05 10:03:02
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了了5123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-11-05 10:03:02
离心取上清，然后用PEG和NaCl沉淀，按道理说不会有宿主DNA啊？

是不是离心时候太猛了？

是 我是PEG NaCl沉淀的，按照分子克隆指南做的，开始是8000rpm 4℃ 15min，取上清然后加PEG NaCl，12000rpm 4℃ 10min 这个有什么不妥吗？
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3楼2015-11-05 10:35:49
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:31:10
了了5123: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-11-06 11:12:31
PEG， NaCl要缓慢分批加入，逐步搅拌，然后离心的时候你看到试管底部有白色的点点了吗？
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2015-11-05 11:42:18
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了了5123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2015-11-05 11:42:18
PEG， NaCl要缓慢分批加入，逐步搅拌，然后离心的时候你看到试管底部有白色的点点了吗？

PEG，NaCl是要分批加入吗？受教了。这样的目的是能让DNA更好地沉淀吗？我后来离心的时候一般情况下可以看到白色的沉淀，有时候多，有时候少，我提了好久的M13ssDNA了，感觉每次提的都会有宿主菌DNA，这个沉淀多少能说明问题吗？
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5楼2015-11-05 14:51:07
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