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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 亲和层析中，上样后再杂交结合3个小时，是怎么做到的
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近川

新虫 (初入文坛)

[交流] 亲和层析中，上样后再杂交结合3个小时，是怎么做到的 已有6人参与

在一篇论文中看到，用镍亲和层析，上样后杂交结合3小时，在用平衡液洗
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1楼 2015-11-02 16:19:37
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hc2015

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
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你指的杂交结合是啥。
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2楼2015-11-03 09:21:27
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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:34:08
可能是上完样后先不洗柱，让里面的重组蛋白、杂蛋白充分与镍柱结合3小时，但具体原因我也不知道。
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我好累，承受这个年纪不该有的帅！
3楼2015-11-03 10:36:27
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近川

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc2015 at 2015-11-03 09:21:27
你指的杂交结合是啥。

应该是镍和蛋白中的组氨酸结合吧
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4楼2015-11-03 15:46:22
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2015-11-05 18:34:23
可能是上样以后用样品溶液把镍柱填料吸出来，然后将样品溶液和填料的混合液放在摇床上轻微震荡结合三小时再加回层析柱里继续平衡纯化？

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
5楼2015-11-03 16:18:14
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haze12344

银虫 (小有名气)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-05 18:34:27
我们以前实验室就是这样做的，将镍柱与蛋白溶液加到一个管子里，室温下在摇床孵育2h然后再装柱洗脱
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生物你好
6楼2015-11-05 14:41:09
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近川

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by haze12344 at 2015-11-05 14:41:09
我们以前实验室就是这样做的，将镍柱与蛋白溶液加到一个管子里，室温下在摇床孵育2h然后再装柱洗脱

原来如此，十分感谢
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7楼2015-11-05 14:55:45
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近川

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by haze12344 at 2015-11-05 14:41:09
我们以前实验室就是这样做的，将镍柱与蛋白溶液加到一个管子里，室温下在摇床孵育2h然后再装柱洗脱

如果直接将镍柱和蛋白加到一个管子，请问上样之前的平衡怎么办？
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8楼2015-11-05 17:43:40
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zhuguiqiu

禁虫 (文坛精英)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-11-05 19:25:19
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guoyanfei

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种操作一般是重力柱，但是要有紫外检测仪检测峰值，用蛋白稀释缓冲液平衡后，取出柱材料后和蛋白溶液混合放置一段时间后重新装柱洗脱
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10楼2015-11-06 09:25:02
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