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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊
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z8411909

新虫 (小有名气)

[求助] ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊 已有5人参与

我刚开始做WB,做ERK1/2这个蛋白做了很多次，但每次曝光出来就只有一个条带。我SDS-PAGE的条件是浓缩胶30min,分离胶1h.寻求虫友的帮助
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1楼 2015-11-02 13:13:43
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
z8411909: 金币+1, ★有帮助 2015-11-03 17:31:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by z8411909 at 2015-11-02 14:57:48
买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带...

你的这两个蛋白的分子量很接近，可能是蛋白没有跑开的缘故，你试试将胶的浓度提高，电压低点，分离的时间长点，
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9楼2015-11-03 16:46:28
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢
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2楼2015-11-02 13:20:05
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z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-11-02 13:20:05
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢

买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带
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3楼2015-11-02 14:57:48
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用HEK293T 能看到两个条带，但是一个条带比另外一个明显深很多
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-11-03 00:07:47
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