应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊
131/2返回列表12下一页
查看: 4247  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

z8411909

新虫 (小有名气)

[求助] ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊 已有5人参与

我刚开始做WB,做ERK1/2这个蛋白做了很多次，但每次曝光出来就只有一个条带。我SDS-PAGE的条件是浓缩胶30min,分离胶1h.寻求虫友的帮助
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-02 13:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-11-03 16:46:28
你的这两个蛋白的分子量很接近，可能是蛋白没有跑开的缘故，你试试将胶的浓度提高，电压低点，分离的时间长点，...

谢谢你的建议，我会试下的
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2015-11-03 17:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢
赞一下 回复此楼
2楼2015-11-02 13:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-11-02 13:20:05
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢

买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-02 14:57:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用HEK293T 能看到两个条带，但是一个条带比另外一个明显深很多
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-11-03 00:07:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-11-03 00:07:47
我用HEK293T 能看到两个条带，但是一个条带比另外一个明显深很多

我用的是分化的PC12细胞，请问你跑胶的条件是什么
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-03 08:50:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
cst的用过啊    能出2条带。
是不是你的细胞不一样啊
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-03 10:43:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by linyingjia at 2015-11-03 10:43:41
cst的用过啊    能出2条带。
是不是你的细胞不一样啊

做ERK1/2有细胞要求吗?我用的是分化的PC12细胞，请问你还记得当时用的多大的胶吗，跑胶的时间？
赞一下 回复此楼
7楼2015-11-03 11:24:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zd1984hero

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
8%10%的分离胶都可以，

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
学海无涯
8楼2015-11-03 11:41:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
z8411909: 金币+1, ★有帮助 2015-11-03 17:31:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by z8411909 at 2015-11-02 14:57:48
买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带...

你的这两个蛋白的分子量很接近，可能是蛋白没有跑开的缘故，你试试将胶的浓度提高，电压低点，分离的时间长点，
赞一下 回复此楼
9楼2015-11-03 16:46:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 z8411909 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭