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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊
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z8411909

新虫 (小有名气)

[求助] ERK1/2蛋白做了很多次，但曝光出来只有一个条带，怎么办啊 已有5人参与

我刚开始做WB,做ERK1/2这个蛋白做了很多次，但每次曝光出来就只有一个条带。我SDS-PAGE的条件是浓缩胶30min,分离胶1h.寻求虫友的帮助
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1楼 2015-11-02 13:13:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-11-03 16:46:28
你的这两个蛋白的分子量很接近，可能是蛋白没有跑开的缘故，你试试将胶的浓度提高，电压低点，分离的时间长点，...

谢谢你的建议，我会试下的
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10楼2015-11-03 17:31:34
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普通回帖

HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢
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2楼2015-11-02 13:20:05
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z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-11-02 13:20:05
你的问题能说的清楚点吗？只有一条带是什么意思？不清楚的问题，怎么让人给你解答呢

买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带
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3楼2015-11-02 14:57:48
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用HEK293T 能看到两个条带，但是一个条带比另外一个明显深很多
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-11-03 00:07:47
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z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-11-03 00:07:47
我用HEK293T 能看到两个条带，但是一个条带比另外一个明显深很多

我用的是分化的PC12细胞，请问你跑胶的条件是什么
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5楼2015-11-03 08:50:43
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
cst的用过啊    能出2条带。
是不是你的细胞不一样啊
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6楼2015-11-03 10:43:41
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z8411909

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by linyingjia at 2015-11-03 10:43:41
cst的用过啊    能出2条带。
是不是你的细胞不一样啊

做ERK1/2有细胞要求吗?我用的是分化的PC12细胞，请问你还记得当时用的多大的胶吗，跑胶的时间？
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7楼2015-11-03 11:24:56
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zd1984hero

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
8%10%的分离胶都可以，

发自小木虫IOS客户端
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学海无涯
8楼2015-11-03 11:41:50
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
z8411909: 金币+1, ★有帮助 2015-11-03 17:31:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by z8411909 at 2015-11-02 14:57:48
买的CST的抗体，该抗体说明书上写的能爆出两个条带ERK1（42KD）和ERK2（44KD），但是我每次做出来只有一个条带...

你的这两个蛋白的分子量很接近，可能是蛋白没有跑开的缘故，你试试将胶的浓度提高，电压低点，分离的时间长点，
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9楼2015-11-03 16:46:28
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