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laraine40

金虫 (小有名气)

[交流] petDuet1插入两个基因,同时加四个酶没切载体有人做过吗? 已有6人参与

如题,我准备做一个两个蛋白的共表达,在pETDuet1的两个不同的多克隆位点里,用两组酶分别双酶切,分别是是Nco1和Sal1,Nde和Xho1。
想问问大侠们酶切一次可以完成吗?四个酶会不会把它切断了?或者有没有什么好点的建议?
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admission

木虫 (著名写手)

7楼2015-11-02 19:07:04
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

我去。。。服了。。。
2楼2015-11-02 10:54:24
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
载体切成4段了,神仙也连不上了

发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-02 13:15:47
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zhangyao7255

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该不行吧,质粒最后一切出来的部分只能各连目的基因的一侧,目的基因的另一侧又不是粘性末端
而且按照你的思路,做出来的蛋白也不是共表达啊。如果前面的有终止密码,后面的就不会表达。如果前面的没有终止密码,和后面的会形成一个连到一体的蛋白,你确定还会有生物活性?
4楼2015-11-02 14:58:28
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