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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切鉴定
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

[交流] 双酶切鉴定

转DH5a后，菌液浑浊正常，菌液PCR鉴定显示有目的基因条带，然而双酶切鉴定的时候为什么没有目的条带，只有最上边的条带，重复几次未果，想知道摇起来的菌是什么东西？
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天道酬勤
1楼 2015-10-31 10:45:57
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jiangronglu

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-01 11:44:16
菌液PCR有出现目的条带，而双酶切无条带，一片空白。把菌液拿去测序用的是通用引物测是失败的测序状态。如何解？...

这个是你选择的酶切位点有问题，中间可能有错配。最后合适双酶切的两个酶是否为同位酶。

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努力就有收获，人人都能成功
10楼2015-11-01 13:26:49
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mcxiaomu1023

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同是沦落人啊~！我这几天也是在做双酶切鉴定，跟楼主一样，也是酶切后跑胶没有目的条带，只有最边上的质粒条带，酶切体系也优化过，跑胶电压也调节过，做了N次还是没有。楼主的目的片段多大？以后多多交流啊~
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2楼2015-11-01 09:17:10
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jiangronglu

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
宁静致远131: 金币+3 2015-11-08 07:30:49
这个存在以下情况：1，转基因的大肠杆菌是否阳性，经菌液pcr鉴定，阳性方可酶切。2，提取的质粒是否有问题，譬如震荡剧烈，断裂之类的。3，酶切位点要合适确认是否正确，此外还需考虑双酶切两个酶的酶切效率，若还是不行可以使用单酶切，分两步进行。

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努力就有收获，人人都能成功
3楼2015-11-01 10:16:31
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rogerqiu

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种情况说明没有酶切开，可以直接提取质粒送去测序，再比对就行了，毕竟是鉴定不需要执着酶切一种办法。

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既来之，则安之
4楼2015-11-01 11:36:34
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