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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 哪位高人帮我看看为什么酶标仪读出来的OD值问题出在哪？
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

[求助] 哪位高人帮我看看为什么酶标仪读出来的OD值问题出在哪？ 已有1人参与

本人做的是间接法测兔血清的最适工作浓度，总共包被了两组，一排12个孔，分别包被的是稀释到1ug/ml的MP和稀释到0.1ug/ml的UreB，用1.5%的BSA封闭，按100,1000,10000,100000倍稀释含MP抗体和UreB抗体的兔血清，每种倍数做两孔，9,10孔是100倍稀释的兔血清作为阴性对照，11,12孔作为空白对照组，酶标仪读出的数如下
                                          1              2             3                  4                 5                6             7            8               9            10              11                 12
       （1ug/ml MP）        2.573       2.512      2.086           1.699           1.534        1.614        0.436      0.413       0.242      0.212         0.208            0.16

       （0.1ug/mlUreB）   2.301       1.899       0.91            0.933           0.217         0.235         0.163    0.172        0.294      0.233         0.208            0.264
结果明显是有问题的啊，而且空白对照组读出来的值怎么会那么高呢，至少也要在0.05左右吧，不知道问题到底出在哪，求高人指点迷津啊！！！
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做好自己的事！
1楼 2015-10-30 15:36:33
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亦风飞扬

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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宇文诗畅: 金币+2, ★有帮助, 能再具体些吗？ 2015-11-02 17:09:32
空白孔读数高的原因很多，首选操作方面：(1) 你二抗的稀释倍数及你二抗的孵育时间，（2）你显色时间的长短，（3）要取一个比如OD570的非特异性波长吸附，然后用OD450减去OD570的值才是吸收值

其次是非操作方面的原因，比如你的包被蛋白能够与抗体非特异性结合等原因。
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亦风飞扬
2楼2015-11-02 09:38:01
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 亦风飞扬 at 2015-11-02 09:38:01
空白孔读数高的原因很多，首选操作方面：(1) 你二抗的稀释倍数及你二抗的孵育时间，（2）你显色时间的长短，（3）要取一个比如OD570的非特异性波长吸附，然后用OD450减去OD570的值才是吸收值

其次是非操作方面的 ...

那请问二抗稀释倍数和孵育时间为什么对空白组读数造成影响呢，还有显色时间也是，能具体说一下吗？
赞一下 回复此楼
做好自己的事！
3楼2015-11-02 17:09:13
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