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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

[求助] 哪位高人帮我看看为什么酶标仪读出来的OD值问题出在哪? 已有1人参与

本人做的是间接法测兔血清的最适工作浓度,总共包被了两组,一排12个孔,分别包被的是稀释到1ug/ml的MP和稀释到0.1ug/ml的UreB,用1.5%的BSA封闭,按100,1000,10000,100000倍稀释含MP抗体和UreB抗体的兔血清,每种倍数做两孔,9,10孔是100倍稀释的兔血清作为阴性对照,11,12孔作为空白对照组,酶标仪读出的数如下
                                          1              2             3                  4                 5                6             7            8               9            10              11                 12
       (1ug/ml MP)        2.573       2.512      2.086           1.699           1.534        1.614        0.436      0.413       0.242      0.212         0.208            0.16

       (0.1ug/mlUreB)   2.301       1.899       0.91            0.933           0.217         0.235         0.163    0.172        0.294      0.233         0.208            0.264
结果明显是有问题的啊,而且空白对照组读出来的值怎么会那么高呢,至少也要在0.05左右吧,不知道问题到底出在哪,求高人指点迷津啊!!!
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亦风飞扬

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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宇文诗畅: 金币+2, 有帮助, 能再具体些吗? 2015-11-02 17:09:32
空白孔读数高的原因很多,首选操作方面:(1) 你二抗的稀释倍数及你二抗的孵育时间,(2)你显色时间的长短,(3)要取一个比如OD570的非特异性波长吸附,然后用OD450减去OD570的值才是吸收值

其次是非操作方面的原因,比如你的包被蛋白能够与抗体非特异性结合等原因。
亦风飞扬
2楼2015-11-02 09:38:01
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 亦风飞扬 at 2015-11-02 09:38:01
空白孔读数高的原因很多,首选操作方面:(1) 你二抗的稀释倍数及你二抗的孵育时间,(2)你显色时间的长短,(3)要取一个比如OD570的非特异性波长吸附,然后用OD450减去OD570的值才是吸收值

其次是非操作方面的 ...

那请问二抗稀释倍数和孵育时间为什么对空白组读数造成影响呢,还有显色时间也是,能具体说一下吗?
做好自己的事!
3楼2015-11-02 17:09:13
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