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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

[交流] 单酶切 后 连接 总连不上啊

将片段和 载体 单酶切 后 连接     筛选的都是载体自连的   也做载体的 脱磷酸化了 啊  唉 愁啊    有何高见 啊 大家  都做了一个月了
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shensc727

金虫 (小有名气)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:41
1、通过空白对照,测试载体磷酸化的效率,如果不好,改进条件!我做过磷酸化,效果不是很好!
2、建议你用双酶切(不同的粘性末端内切酶),回收,然后连接,这样效率高!我不太清楚你的情况!难道你的试验只能做单酶切吗?
3、你的目的基因是PCR产物直接回收然后酶切吗?建议你先连T载体,然后酶切回收!
6楼2008-09-10 09:15:56
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

呵呵

载体单酶切后,胶回收.
2楼2008-09-09 23:24:48
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

载体用 回收吗  直接抽提  乙醇沉淀 不久好了  反正就一个片段 ,  不过我的目的片段是从另一个载体上切下来的  是胶回收的
3楼2008-09-09 23:53:41
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xipha

木虫 (正式写手)

脱磷酸化不足,建议改进。
4楼2008-09-10 08:52:23
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