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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 农杆菌转化 菌斑大小不一 摇不浑
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离弦箭523

新虫 (初入文坛)

[交流] 农杆菌转化 菌斑大小不一 摇不浑

各位大神求解
8月底构建了一批农杆菌载体（菌株GV3101），先前可以摇浑（kana+gms）,后来发现摇不浑，然后就重新划线，结果也不能摇浑，怀疑菌株有问题，然后就重新做电转，依然摇不浑，就重新买了感受态，就直接挑斑检测，发现PCR可以检测到阳性克隆，但是在300ML的双抗LB中却摇不浑，而且培养基上长的斑大小也不太一样。怎么破呢，郁闷中，诚恳求助
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1楼 2015-10-25 21:15:52
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离弦箭523

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冬至1221 at 2015-10-25 22:18:48
先用3ml双抗LB小摇，然后再接卡娜单抗大摇试一下。。。我们一直是这么做的

现在实验室小摇1ml都会出现沉淀 没浑到一定程度的时候就开始有絮状或是白色的片状沉淀。大摇不加rif 不担心会长杂菌吗
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3楼2015-10-26 10:31:52
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冬至1221

新虫 (初入文坛)
先用3ml双抗LB小摇，然后再接卡娜单抗大摇试一下。。。我们一直是这么做的

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2楼2015-10-25 22:18:48
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冬至1221

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
离弦箭523: 金币+5 2015-10-31 22:50:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by 离弦箭523 at 2015-10-26 10:31:52
现在实验室小摇1ml都会出现沉淀 没浑到一定程度的时候就开始有絮状或是白色的片状沉淀。大摇不加rif 不担心会长杂菌吗...

额，农杆菌很难摇的，我们摇3ml的要摇一天半，还是建议先小摇了再接大体积吧

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4楼2015-10-26 23:34:36
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次身儿

新虫 (初入文坛)
我现在也是摇不浑，时间长就会有絮状沉淀，不知道题主的问题解决了么？

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5楼2016-09-23 10:25:56
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