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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问感受态做不好是哪出问题了？
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huangsf8978

[交流] 请问感受态做不好是哪出问题了？

因实验需要，我做了很长时间的感受态，可转化率老是很低，哪为高手帮忙出个招啊？不盛感激！！！
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1楼 2008-09-08 11:23:11
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
不要这么耗时间了，直接买吧。
影响感受态转化效率的因素很多，论坛上有很多，http://muchong.com/html/200511/142549.html
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2楼2008-09-08 11:25:33
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argnout

金虫 (小有名气)
E.coli感受态很好制啊
只要不是建库没问题
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3楼2008-09-08 16:18:41
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xipha

木虫 (正式写手)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):谢谢
只要感受态菌种没问题，主要在于：
1、所用器皿洁净，特别不能有洗涤剂等表面活性剂残留；CaCl，MgCl过滤除菌。
2、全程尽量4度（冰浴），离心机预冷
3、OD，我个人取2.5-3.0


以上说的是化感（CaClMgCl洗的那个效率就足够了），电感我做不多，没经验。祝早日搞出高效感受态。

[ Last edited by xipha on 2008-9-8 at 16:59 ]
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4楼2008-09-08 16:55:40
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
要出问题就是：CaCl2
重新配。配方见分子克隆第2 或3版
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5楼2008-09-08 22:33:59
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)
感受态制备的关键就是低温，速度快，轻柔
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6楼2008-09-09 10:08:38
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)
感受态制备完后放置一个小时以上，转化效率会高一些
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7楼2008-09-09 10:09:22
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:37
感受态的制备需要准备的东西很多：
一，菌株要好，做之前重新划平板
二，所有试剂的配制要求超纯水，试剂瓶要再超纯水中浸泡
三，转接时的OD值要准，大了小了都不行
四，操作要轻柔，在冰上，超净台操作
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8楼2008-09-09 10:16:01
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sjpace

新虫 (初入文坛)
用TSS做出的感受态转化效率较高。另外转化效率高低也有其他影响因素，转化时间要控制好，涂板所用玻璃棒要冷却下来，
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9楼2008-09-09 15:19:29
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znnwzh

感觉主要是菌株的问题，我以前转化率都挺高的，从哪一天开始就连续做不好，后来感觉是制备感受态的过程中有点问题。制备感受态，动作一定要快，要轻，尽量冰上操作，开始可以先少做，先试两管，效果好可多做。转化率不高可以试着换一下菌株种类，可能会有新发现。
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10楼2008-09-09 20:24:02
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