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huangsf8978

[交流] 请问感受态做不好是哪出问题了?

因实验需要,我做了很长时间的感受态,可转化率老是很低,哪为高手帮忙出个招啊?不盛感激!!!
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

不要这么耗时间了,直接买吧。
影响感受态转化效率的因素很多,论坛上有很多,http://muchong.com/html/200511/142549.html
2楼2008-09-08 11:25:33
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argnout

金虫 (小有名气)

E.coli感受态很好制啊
只要不是建库没问题
3楼2008-09-08 16:18:41
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xipha

木虫 (正式写手)

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):谢谢
只要感受态菌种没问题,主要在于:
1、所用器皿洁净,特别不能有洗涤剂等表面活性剂残留;CaCl,MgCl过滤除菌。
2、全程尽量4度(冰浴),离心机预冷
3、OD,我个人取2.5-3.0


以上说的是化感(CaClMgCl洗的那个效率就足够了),电感我做不多,没经验。祝早日搞出高效感受态。

[ Last edited by xipha on 2008-9-8 at 16:59 ]
4楼2008-09-08 16:55:40
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

要出问题就是:CaCl2
重新配。配方见分子克隆第2 或3版
5楼2008-09-08 22:33:59
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)

感受态制备的关键就是低温,速度快,轻柔
6楼2008-09-09 10:08:38
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darkblue111

铜虫 (初入文坛)

感受态制备完后放置一个小时以上,转化效率会高一些
7楼2008-09-09 10:09:22
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:37
感受态的制备需要准备的东西很多:
一,菌株要好,做之前重新划平板
二,所有试剂的配制要求超纯水,试剂瓶要再超纯水中浸泡
三,转接时的OD值要准,大了小了都不行
四,操作要轻柔,在冰上,超净台操作
8楼2008-09-09 10:16:01
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sjpace

新虫 (初入文坛)

用TSS做出的感受态转化效率较高。另外转化效率高低也有其他影响因素,转化时间要控制好,涂板所用玻璃棒要冷却下来,
9楼2008-09-09 15:19:29
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znnwzh

感觉主要是菌株的问题,我以前转化率都挺高的,从哪一天开始就连续做不好,后来感觉是制备感受态的过程中有点问题。制备感受态,动作一定要快,要轻,尽量冰上操作,开始可以先少做,先试两管,效果好可多做。转化率不高可以试着换一下菌株种类,可能会有新发现。
10楼2008-09-09 20:24:02
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