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【答案】应助回帖
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中国的_BOY: 金币+100, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊，翻译的不错 2015-10-23 09:01:57
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细菌分离物的冻存原种来自于康奈尔大学食品安全实验室(CU-FSL) 菌种保存。将培养物自−80°C冻存原种划线接种于脑心浸液(Difco, Sparks, MD)琼脂上32°C培养18 h。每一株选一个菌落接种于无菌16-mm玻璃试管内的5ml脑心浸液肉汤，置 32°C通气（220 rpm振摇）培养48h。取每份1ml培养物于14,000 × g离心、去上清。所得细胞沉淀物用1ml磷酸盐稀释缓冲液(Weber Scientific, Trenton, NJ)再悬浮，稀释的 1,000 至10,000 cfu/mL,以大约2 to 3 log cfu/mL量接种于市售超高温巴氏消毒的牛奶(1% 牛奶; Organic Valley, La Farge, WI)。培养菌液计数以适当稀释度于SPC（标准平板计数）琼脂 (EMD, Gibbstown, NJ)上做旋转平板涂布，32°C 培养 24至 48 h 。接种了细菌的超高温消毒牛奶置6°C 孵育48 h模拟冰箱贮存条件。接种了细菌的超高温消毒牛奶样品经6°C 孵育48 h后，用磷酸盐稀释缓冲液适当稀释，双份接种于（1） SPC倾注平板 (SPCP); （2）旋转平板涂布接种SPC (SPCS); (3)CVTA（结晶紫四氮唑） [平板计数琼脂(EMD, Gibbstown, NJ) 含 2,3,5-氯化三苯四氮唑 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)] 倾注平板(CVTAP); (4) 旋转平板涂布接种CVTA(CVTAS); (5)VRBA（紫红胆汁琼脂）倾注接种平板 (Difco, Sparks, MD); (6) 以大约5mlVRBA覆盖VRBA琼脂 (VRBAO); (7)CPETRI (大肠杆菌皿膜） (3M);或(8) 旋转平板涂布接种MAC（麦康凯）(Difco)。所有培养基置32°C 培养48 h，于24和48h后计数。实验进行了3次生物学重复。 |
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