24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zyf902527

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 191.5
散金: 70
帖子: 32
在线: 7.6小时
虫号: 3484961
注册: 2014-10-19
性别: MM
专业: 蛋白质组学

[求助] 牛精子蛋白提取

最近在做二维电泳，在裂解蛋白时出了问题：（1）用尿素盐酸胍的方法裂解牛精子，沉淀蛋白不溶解，尿素裂解液（7M的尿素、2M硫脲、4%CHAPS、1mM EDTA、65mM DTT），2M的盐酸胍(1.9g盐酸胍、0.05g Tris、1mM EDTA、10ml蒸馏水)，溶解蛋白的溶解液是和尿素裂解液一样。
（2）用TCA-丙酮沉淀后的牛精子蛋白，蛋白呈黄色的，也是不能完全溶解，溶解液也是用尿素裂解液。
我在网上看到有用超声助溶的，加热的25℃过夜的，往TCA-丙酮沉淀后的牛精子蛋白里加上0.2M的氢氧化钠1ul,或往尿素盐酸胍裂解的沉淀蛋白里加β-ME，都试过了，还是不见蛋白溶解，这是怎么回事呀？
急求各位师姐师兄的帮助，谢谢！

回复此楼