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[交流]
急求pBC-Hygro质粒的全序列
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如题，本人由于课题中使用到这个质粒，但未知其序列，不好操作，请大家帮帮忙啊！谢过先！ lisong821123@126.con （请留下ID，方便付款，呵呵，，，） [search]pBC-Hygro[/search] |
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4楼2008-09-08 09:39:56
2楼2008-09-07 16:16:52
qgaoamtf
至尊木虫 (职业作家)
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关于pBC-Hygro质粒的全序列
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毕赤酵母(金币+10,VIP+0):非常感谢！！！
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pBC-Hygro质粒的全序列系法国的Philippe Silar教授构建，具体说是将hygromycin B resistance cassette在从plasmid pMOcosX (http://www.sciencedirect.com/sci ... 8c4185a525add84f6a) 在AvaI-SphI 处切下，再连接到pBC-SK+ bluescript vector (Stratagene：http://www.addgene.org/pgvec1?f= ... q&vectorid=209; http://www.stratagene.com/products/displayProduct.aspx?pid=265), 其中在pBC-Hygro质粒中，hygR coding sequence is under the control of the Neurospora crassa cpc-1 promoter and the Aspergillus nidulans trpC terminator (http://www.fgsc.net/fgn42/silar.html), 问题在于： 1. 从Orbach 1994 Gene 150:159-162中可知，hygR coding sequence is under the control of the Neurospora crassa cpc-1 promoter，但 Aspergillus nidulans trpC terminator是由Orbach 还是Philippe Silar教授构建，则需查阅Orbach 1994 Gene 150:159-162的文献（可在小木虫【文献求助】中求），注：我个人认为这部分也是由Orbach构建； 2. hygromycin B resistance cassette如何插入pBC-SK+ bluescript vector？ pBC-SK+质粒有2个 AvaI位点，但无SphI位点，(a). SphI同尾酶？ (b). 在SphI与某个位点之间插入 Aspergillus nidulans trpC terminator？ 注：这里我认为pBC-SK+ bluescript vector与pBC-SK+质粒是一个东东。 最终建议： 1. 直接向Philippe Silar教授索要序列, email: philippe.silar@igmors.u-psud.fr (http://www.igmors.u-psud.fr/SILAR-Philippe.html?lang=en)； 2. 自己拼接； 3. 根据pBC-SK+质粒的MCS序列设计引物并测序插入接头部位； 至于金币吗就免了，我的事情也请您多费心吧！呵呵！  [ Last edited by qgaoamtf on 2008-9-7 at 20:20 ] |
3楼2008-09-07 20:14:51