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毕赤酵母

木虫 (正式写手)

[交流] 急求pBC-Hygro质粒的全序列

如题,本人由于课题中使用到这个质粒,但未知其序列,不好操作,请大家帮帮忙啊!谢过先!

lisong821123@126.con

(请留下ID,方便付款,呵呵,,,)
[search]pBC-Hygro[/search]
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毕赤酵母

木虫 (正式写手)

大家帮帮忙啊
掏干金币我也干啊,呵呵
越努力越幸运
2楼2008-09-07 16:16:52
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

关于pBC-Hygro质粒的全序列

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
毕赤酵母(金币+10,VIP+0):非常感谢!!!
pBC-Hygro质粒的全序列系法国的Philippe Silar教授构建,具体说是将hygromycin B resistance cassette在从plasmid pMOcosX (http://www.sciencedirect.com/sci ... 8c4185a525add84f6a) 在AvaI-SphI 处切下,再连接到pBC-SK+ bluescript vector (Stratagene:http://www.addgene.org/pgvec1?f= ... q&vectorid=209; http://www.stratagene.com/products/displayProduct.aspx?pid=265), 其中在pBC-Hygro质粒中,hygR coding sequence is under the control of the Neurospora crassa cpc-1 promoter and the Aspergillus nidulans trpC terminator (http://www.fgsc.net/fgn42/silar.html), 问题在于:
1. 从Orbach 1994 Gene 150:159-162中可知,hygR coding sequence is under the control of the Neurospora crassa cpc-1 promoter,但 Aspergillus nidulans trpC terminator是由Orbach 还是Philippe Silar教授构建,则需查阅Orbach 1994 Gene 150:159-162的文献(可在小木虫【文献求助】中求),注:我个人认为这部分也是由Orbach构建;
2. hygromycin B resistance cassette如何插入pBC-SK+ bluescript vector? pBC-SK+质粒有2个 AvaI位点,但无SphI位点,(a). SphI同尾酶? (b). 在SphI与某个位点之间插入 Aspergillus nidulans trpC terminator?
注:这里我认为pBC-SK+ bluescript vector与pBC-SK+质粒是一个东东。

最终建议:
1. 直接向Philippe Silar教授索要序列, email: philippe.silar@igmors.u-psud.fr (http://www.igmors.u-psud.fr/SILAR-Philippe.html?lang=en);
2. 自己拼接;
3. 根据pBC-SK+质粒的MCS序列设计引物并测序插入接头部位;

至于金币吗就免了,我的事情也请您多费心吧!呵呵!

[ Last edited by qgaoamtf on 2008-9-7 at 20:20 ]
3楼2008-09-07 20:14:51
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hwqstrong

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
毕赤酵母(金币+3,VIP+0):多谢!
4楼2008-09-08 09:39:56
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