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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 有做过双向电泳的进来聊聊啊
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[求助] 有做过双向电泳的进来聊聊啊

LZ最近需要做双向电泳，用的是从植物组织中提取的蛋白质，可是没做过等电聚焦电泳。而且提取的蛋白样品也不清楚是直接在离心后取上清-80℃冷藏 还是 真空冷凝干燥以粉末状保存。SDS-PAGE也和平时跑电泳时不同，毕竟等电聚焦后的IPG胶条在SDS时要用到。
当然现在最想了解的是蛋白质的保存状态，是上清还是干粉？小伙伴在哪？求支援
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1楼 2015-10-17 21:12:51
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学术茹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 上官abc at 2015-10-17 21:12:51
LZ最近需要做双向电泳，用的是从植物组织中提取的蛋白质，可是没做过等电聚焦电泳。而且提取的蛋白样品也不清楚是直接在离心后取上清-80℃冷藏 还是 真空冷凝干燥以粉末状保存。SDS-PAGE也和平时跑电泳时不同，毕竟 ...

冻干粉的意义主要在于浓缩样品浓度，易于保存，如果你蛋白达到双向电泳要求浓度就可以直接上样，越少步骤对蛋白完整越好

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2楼2015-11-14 15:51:46
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a1838

新虫 (初入文坛)
样品处理要脱盐，尽量用水溶解蛋白样品。

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3楼2015-11-14 23:29:32
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徐晓婷

新虫 (初入文坛)
你好，我最近也需要从黄瓜做双向电泳，我也是初学者，你能不能先从蛋白提取上给我点建议，或是把你具体的操作步骤之类的共享一下，谢谢
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4楼2016-03-28 17:02:33
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 徐晓婷 at 2016-03-28 17:02:33
你好，我最近也需要从黄瓜做双向电泳，我也是初学者，你能不能先从蛋白提取上给我点建议，或是把你具体的操作步骤之类的共享一下，谢谢

不知道是否有用，可以看看：双向凝胶电泳步骤：http://www.detaibio.com/topics/shuang-xiang-ning-jiao-dian-yong.html
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5楼2016-03-28 17:34:08
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