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Stridegogogo捐助贵宾 (小有名气)
小可爱
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[求助]
大神帮忙看，SDS-PAGE检测此重组表达蛋白（酶）基本都在沉淀里，上清会否有酶活？ 已有4人参与
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请大神帮我看看，第一条带是marker，第二三四条带分别是空载体的全菌上清沉淀，后三条带，分别是 重组蛋白破碎后的全菌 上清 沉淀。我感觉蛋白都在沉淀里，基本上清理完全没有，我表达的是一个酶，但是理论上上清里应该也是含有的啊，但是我没有检测到活性，大家遇到这种情况都是怎么做，用上清还是包涵体复性？ 未命名图片.png |
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ls5940
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★ ★ ★ ★ ★
Stridegogogo: 金币+5, ★有帮助 2015-10-20 11:54:36
Stridegogogo: 金币+5, ★有帮助 2015-10-20 11:54:36
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换一个宿主细胞再试试。如果还是不行，就得尝试换载体，或者尝试包涵体复性吧。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2015-10-17 22:14:46
ls5940
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你这张图说明你这个酶是胞内且不可溶或者包涵体过分表达。你用上清并不起任何作用。我建议你低温诱导，比如16度。这样有可能不会过分折叠。可能会出现在上清中。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-10-17 09:12:26
Stridegogogo
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3楼2015-10-17 14:38:36
感谢参与，应助指数 +1
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5楼2015-10-17 22:23:51
40