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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] PCR疑惑 已有3人参与

我用相同的引物去P一个片段，使用温度梯度，一个50~55度，一个是55~60度，最后P出来的片段大小也不一样，这是怎么个情况？
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1楼 2015-10-14 09:27:00
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kodey

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能引物特异性不好，你用的是什么梯度？Touchdown PCR？
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2楼2015-10-14 10:13:30
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
温度梯度，两次温度范围不一样，出来的条带也不一样

发自小木虫Android客户端
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3楼2015-10-14 13:18:01
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kodey at 2015-10-14 10:13:30
可能引物特异性不好，你用的是什么梯度？Touchdown PCR？

温度梯度，两次温度范围不一样，出来的条带也不一样
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4楼2015-10-14 13:19:31
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
取个什么名啊: 金币+5, ★有帮助 2015-10-15 08:34:26
问题是你知不知道你想p的片段多大，另一条不管就是了
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5楼2015-10-14 14:50:43
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
取个什么名啊: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-15 08:34:10
取个什么名啊: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 15 2015-12-21 11:01:46
关键是你P出来的有目的条带没有？这种情况很正常，温度范围不一样，条带不一样，，不然要摸索温度干嘛呢，一个温度P出来的是目的条带，那另一个就不是，说明温度不合适，如果都不是目的条带，说明温度还没有摸索对呗，那就继续摸索，可能条带又不一样了呢，，，，好好理解下，这种情况没事的，提供一个提供PCR特异性方法的
http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html
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6楼2015-10-14 16:02:44
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