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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问同源克隆跟RACE得到的片段拼接的时候，有几个不同的碱基，应该以哪一个为准？
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 请问同源克隆跟RACE得到的片段拼接的时候，有几个不同的碱基，应该以哪一个为准？

请问同源克隆跟RACE得到的片段拼接的时候，有几个不同的碱基，应该以哪一个为准？
对照着看了一下重合的部分，有这几个碱基不一样，最后翻译的氨基酸也有一个不一样（苯丙氨酸和亮氨酸）

请问这种情况下该看哪一个啊···

当时没计较，直接用5RACE保的菌拿来设计引物构建载体了，结果目的基因一直就是RACE的那个，有一个碱基不一样，万一不对怎么办啊？
也不知道是测序的问题还是发生突变了

提交genebank，写文章和论文的时候该以哪个为准呢？
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1楼 2015-10-13 23:03:21
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
如果你要提交序列的话，我建议在没有争议的位置重新设计引物，高保真酶扩增，测序。一方面验证序列，一方面验证拼接是否正确。因为之前的序列保真性都不高，而且不同个体的序列也有可能不同。

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2楼2015-10-14 08:12:22
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