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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SSR的PAGE电泳求助
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mouseludi

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 关于SSR的PAGE电泳求助

这是我分别用两个引物PCR扩出来后PAGE,银染后的结果
琼脂糖检测跑的水平胶都是一条带(不包括前面的引物2聚体),
怎么这里多出来了这么多的带啊,
我点样时也没有相互污染啊,样品间完全一样,我怎么分析结果啊?

请高人指点下,谢谢啦!





[ Last edited by mouseludi on 2008-9-5 at 22:51 ]
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1楼 2008-09-05 11:07:34
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fruit

木虫 (小有名气)
你的图片到哪儿去了？
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2楼2008-09-05 11:38:48
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mouseludi

铁杆木虫 (小有名气)
现在有图啦,先前用新浪的相册,上传不太好
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3楼2008-09-05 22:52:48
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:39
有非特异扩增，一般琼脂糖检测没那么灵敏，检测不到，PAGE会跑的比较清楚。
如果不影响你的主带，那是没关系的。
如果不想要那些非特异扩增，优化下PCR 条件体系，可能就没有杂带了。
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4楼2008-09-06 17:14:00
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mouseludi

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shenye.judy at 2008-9-6 17:14:
有非特异扩增，一般琼脂糖检测没那么灵敏，检测不到，PAGE会跑的比较清楚。
如果不影响你的主带，那是没关系的。
如果不想要那些非特异扩增，优化下PCR 条件体系，可能就没有杂带了。

哦,那么应该怎么优化PCR的反应条件呢?
是因为杂质太多了吗?
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5楼2008-09-06 19:02:07
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
可以降低点退火温度试试。
如果你是为了读带，这样也可以了，只要主带清楚，摸条件还是比较烦琐的。
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6楼2008-09-06 19:28:31
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gmdp

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shenye.judy at 2008-9-6 19:28:
可以降低点退火温度试试。
如果你是为了读带，这样也可以了，只要主带清楚，摸条件还是比较烦琐的。

弱弱的问？是提高退火温度吧？呵呵
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7楼2008-09-06 20:05:09
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mouseludi

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gmdp at 2008-9-6 20:05:

弱弱的问？是提高退火温度吧？呵呵

额...到底该如何呀?能否告知理由啊?
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8楼2008-09-06 21:45:09
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Asan0526

上面几位已经说得很清楚了，对主带读带不影响那么非特异带就无所谓了。如果你一定要消除。可以从以下两点考虑：一是适当提高退火温度，二是适当降低Mg2＋含量并优化体系
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9楼2008-09-10 16:20:12
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Asan0526

楼主看样子是刚做分子实验，优化体系不是去除杂质，优化体系是将反应体系中各个成份含量调整变化以达到实验结果的最佳状态。譬如一辆汽车，其发动机，变速箱，底盘等都一般化，但经过不同专业人士的调校后能发挥出车子不同的性能。
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10楼2008-09-10 16:29:35
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