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cl8682535

银虫 (小有名气)

[求助] 紫外分光光度法测定总核酸含量

求助各位虫友~
最近测定固态发酵中微生物的菌体量,运用的是“紫外分光光度法”检测核酸含量来表征菌体量的多少,具体方法如下:茶叶中微生物核酸的提取测定方法:取0.25g干燥培养物, 适当研磨,加入25mL 5%的三氯乙酸溶液,于80℃水浴中提取25min,其间不断进行搅拌,取出后冰浴冷却,然后8000r/min,4℃离心15 min ,稀释5倍,以5 %三氯乙酸作空白对照,于260nm处测OD值。
测OD值时遇到了麻烦,数值大幅度来回波动!逛完各种帖后,发现可能原因有:(1)样液中含有固态杂质;(2)溶液体系不稳定,仍有反应进行。针对原因(1),进行了滤纸过滤,超滤膜过滤,低温高速离心过后,未能解决问题,说明OD值的变动很有可能是原因(2)导致;针对原因(2),将溶液长时间静置或者增大原液稀释倍数,也没能解决问题。
请问各位虫友,这种情况该如何处理?是否需要用到传说中的稳定剂?如果需要,怎样才能知道是哪种稳定剂呢?
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小创1986

铜虫 (小有名气)

楼主你这种核酸提取方法有参考文献吗?来自于哪里?
2楼2015-11-04 22:24:31
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