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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教PCR产物直接测序的问题
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speculiar

银虫 (小有名气)

[交流] 请教PCR产物直接测序的问题

下午做了胶回收，习惯性用试剂盒配带的elution buffer溶解的。。。。
请问elution buffer会不会影响测序呀？
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1楼 2008-09-04 21:02:24
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speculiar

银虫 (小有名气)
啊~google到了。会影响
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2楼2008-09-04 21:26:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
看看你的elute buffer是什么
如果是Tris，不怕，TE可能就有问题
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3楼2008-09-04 21:32:26
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speculiar

银虫 (小有名气)
网上说elution buffer里面一般含有EDTA，所以应该会影响的。只好明天做纯化了

还有请问大家做胶回收一般得率有多高？真的象试剂盒介绍吹的那样99%？
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4楼2008-09-04 22:49:48
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
很多试剂盒都会在说明书中说明洗脱缓冲液对下一步反应的影响，确实，如果EDTA多了的话是会对下一步实验有影响，但现在的试剂盒基本都不会对下一步实验有什么影响了。
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金币是赌出来的
5楼2008-09-05 14:06:44
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wul1984

金虫 (正式写手)
lz可以让公司测一下，反正测不出来又不收费！感觉应该影响不会很大！毕竟用于测序的样品量很少，里面的EDTA就更少了！
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6楼2008-09-05 15:48:39
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)
用灭菌蒸馏水溶解最好。测序反应也是Taq酶的聚合反应，需要一个最佳的酶反应条件。如果DNA用缓冲液溶解后，在进行测序反应时，DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体系条件，造成Taq酶的聚合性能下降。
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7楼2008-09-07 09:59:51
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
胶回收率就要看你用的试剂盒质量了 好的公司的一般都没有问题 像TaKara Promega都可以 不要图省钱 国产的一般回收率都不高
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8楼2008-09-07 12:44:36
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