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speculiar

银虫 (小有名气)

[交流] 请教PCR产物直接测序的问题

下午做了胶回收,习惯性用试剂盒配带的elution buffer溶解的。。。。
请问elution buffer会不会影响测序呀?
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speculiar

银虫 (小有名气)

啊~google到了。会影响
2楼2008-09-04 21:26:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

看看你的elute buffer是什么
如果是Tris,不怕,TE可能就有问题
3楼2008-09-04 21:32:26
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speculiar

银虫 (小有名气)

网上说elution buffer里面一般含有EDTA,所以应该会影响的。只好明天做纯化了

还有请问大家做胶回收一般得率有多高?真的象试剂盒介绍吹的那样99%?
4楼2008-09-04 22:49:48
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

很多试剂盒都会在说明书中说明洗脱缓冲液对下一步反应的影响,确实,如果EDTA多了的话是会对下一步实验有影响,但现在的试剂盒基本都不会对下一步实验有什么影响了。
金币是赌出来的
5楼2008-09-05 14:06:44
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wul1984

金虫 (正式写手)

lz可以让公司测一下,反正测不出来又不收费!感觉应该影响不会很大!毕竟用于测序的样品量很少,里面的EDTA就更少了!
6楼2008-09-05 15:48:39
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lxlxyc

铜虫 (小有名气)

用灭菌蒸馏水溶解最好。测序反应也是Taq酶的聚合反应,需要一个最佳的酶反应条件。如果DNA用缓冲液溶解后,在进行测序反应时,DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体系条件,造成Taq酶的聚合性能下降。
7楼2008-09-07 09:59:51
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

胶回收率就要看你用的试剂盒质量了 好的公司的一般都没有问题 像TaKara Promega都可以 不要图省钱 国产的一般回收率都不高
8楼2008-09-07 12:44:36
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