24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1265  |  回复: 13
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助克隆后基因有突变的问题

大侠们,我正在做一个微生物酶的克隆表达,经测序后发现与该微生物在NCBI中推断的基因序列相比发生了一个突变,导致一个氨基酸也发生改变。请问大家,这个突变是在什么过程中产生的?我该如何解决?
还有,大家pcr都用哪种taq?普通,EX 还是pfu?我用的是最普通的
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

建议你有LA-Taq (TaKaRa) 扩增能力强 也具有一定的保真能力
如果一开始就从基因组或CDNA中扩,用PFu可能扩增不出来
这种单个碱基的突变是有可能发生的
你看一下峰图是不是由于测序的问题
7楼2008-09-03 10:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
用于做表达的基因扩增最好用pfu酶,尽力避免突变
用pfu扩增一下,如果还是有这个位点的突变的话,应该是你用于扩增的模板本身的原因
【用pfu扩增时不妨重复扩增一次,扩增结果都进行测序,减少pcr过程中的误差】
2楼2008-09-03 09:08:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
普通taq酶据说是有千分之一的错配几率,如果是taq引起的突变,那最好的方法就是改用其他高保真的DNA聚合酶。很多厂家都有这种合适的酶,主要利用了酶的5‘-3’外切酶活性。
金币是赌出来的
3楼2008-09-03 09:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)

不一定是克隆的问题

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
必须排除菌株的差异,我曾经做同一个种的2个地方得到的菌株,基因有约1%的差异。再者只要有生物活性不必考虑点突变吧。
闹太套
4楼2008-09-03 09:29:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 高温高压反应求助 10+3 chibby 2026-03-25 3/150 2026-03-27 19:18 by pin4501
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[考研] 269专硕求调剂 +10 金恩贝 2026-03-21 10/500 2026-03-27 15:10 by caszguilin
[考研] 一志愿211,335分,0856,求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +10 材料学257求调剂 2026-03-23 11/550 2026-03-27 10:13 by YCIT- LHL
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +5 nnnnnnn5 2026-03-25 5/250 2026-03-27 04:42 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见