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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求助克隆后基因有突变的问题

大侠们,我正在做一个微生物酶的克隆表达,经测序后发现与该微生物在NCBI中推断的基因序列相比发生了一个突变,导致一个氨基酸也发生改变。请问大家,这个突变是在什么过程中产生的?我该如何解决?
还有,大家pcr都用哪种taq?普通,EX 还是pfu?我用的是最普通的
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

这个氨基酸是不是在你克隆的微生物酶的活性中心或者什么关键部位,一般只要不影响活性的话,有一个点突变也没有什么关系的。继续做下去,看看这个携带点突变的酶有无活性?
位卑未敢忘忧国。
6楼2008-09-03 09:47:53
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查看全部 14 个回答

greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
用于做表达的基因扩增最好用pfu酶,尽力避免突变
用pfu扩增一下,如果还是有这个位点的突变的话,应该是你用于扩增的模板本身的原因
【用pfu扩增时不妨重复扩增一次,扩增结果都进行测序,减少pcr过程中的误差】
2楼2008-09-03 09:08:07
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
普通taq酶据说是有千分之一的错配几率,如果是taq引起的突变,那最好的方法就是改用其他高保真的DNA聚合酶。很多厂家都有这种合适的酶,主要利用了酶的5‘-3’外切酶活性。
金币是赌出来的
3楼2008-09-03 09:14:01
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biogefart

木虫 (著名写手)

不一定是克隆的问题

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
必须排除菌株的差异,我曾经做同一个种的2个地方得到的菌株,基因有约1%的差异。再者只要有生物活性不必考虑点突变吧。
闹太套
4楼2008-09-03 09:29:37
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