应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因克隆
51/1返回列表
查看: 943  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiyounuli

新虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有2人参与

大家好，这段时间做基因克隆好像到瓶颈期了，我做的是与叶绿素降解相关的一个基因，叶绿素酶基因，现在是这个基因的3‘端拿到了，5’端也做了染色体步移，根据两个测序结果设计引物再P，不知道为什么就是没有条带，这是哪里出问题了，现在也不知道是要换引物还是该怎么做，求指点啊，这个基因都拿了太久了，抓狂
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-28 10:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:51:05
你可以在数据库上搜索改基因的同源基因，了解基因相关信息，如基因长度（太长是不是要调整PCR程序），基因表达谱（用表达量最高的时期组织），再就是下载同源基因做同源比对，从而可不可以考虑在保守区域设计引物分段克隆，等等啦

PCR无产物的原因很多，引物/模板/程序等都有可能出现问题的

以上仅供参考
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2015-09-28 11:38:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

品茗听雨0530

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你可以试试梯度PCR，多试几个退火温度
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-28 21:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yali002

新虫 (初入文坛)
我也是啊
回复此楼
4楼2016-04-12 17:33:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yali002

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 品茗听雨0530 at 2015-09-28 21:58:25
我觉得你可以试试梯度PCR，多试几个退火温度

请问大师 回收染色体步移的片段是要回首第3次产物里面最亮的那一条么？我回收的就是最亮的那一条 可是有个问题  第一次的产物弥散  2次的产物有两条带 第3次的产物有一条带 很亮  。但是，它的片段长度貌似比第2次的产物长。。。按理说，应该第3次的最短的。是么？
赞一下 回复此楼
5楼2016-04-12 17:38:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiyounuli 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[硕博家园] 一篇论文同时出现在两个期刊，一模一样，这算不算学术不端，请各位老师斧正。 +11 mahl005 2026-06-14 12/600 2026-06-18 17:01 by 770904134
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭