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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因克隆
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weiyounuli

新虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有2人参与

大家好，这段时间做基因克隆好像到瓶颈期了，我做的是与叶绿素降解相关的一个基因，叶绿素酶基因，现在是这个基因的3‘端拿到了，5’端也做了染色体步移，根据两个测序结果设计引物再P，不知道为什么就是没有条带，这是哪里出问题了，现在也不知道是要换引物还是该怎么做，求指点啊，这个基因都拿了太久了，抓狂
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1楼 2015-09-28 10:54:57
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-28 22:51:05
你可以在数据库上搜索改基因的同源基因，了解基因相关信息，如基因长度（太长是不是要调整PCR程序），基因表达谱（用表达量最高的时期组织），再就是下载同源基因做同源比对，从而可不可以考虑在保守区域设计引物分段克隆，等等啦

PCR无产物的原因很多，引物/模板/程序等都有可能出现问题的

以上仅供参考
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没有做不到，只有想不到！
2楼2015-09-28 11:38:48
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品茗听雨0530

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你可以试试梯度PCR，多试几个退火温度
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3楼2015-09-28 21:58:25
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yali002

新虫 (初入文坛)
我也是啊
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4楼2016-04-12 17:33:44
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yali002

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 品茗听雨0530 at 2015-09-28 21:58:25
我觉得你可以试试梯度PCR，多试几个退火温度

请问大师 回收染色体步移的片段是要回首第3次产物里面最亮的那一条么？我回收的就是最亮的那一条 可是有个问题  第一次的产物弥散  2次的产物有两条带 第3次的产物有一条带 很亮  。但是，它的片段长度貌似比第2次的产物长。。。按理说，应该第3次的最短的。是么？
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5楼2016-04-12 17:38:14
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