应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR
91/1返回列表
查看: 1007  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wxb2061

银虫 (小有名气)

[求助] PCR 已有3人参与

pcr仪各阶段温度，时间设计，最近刚开始做PCR不是了解，我的基因片段1511bp，求告知
回复此楼

» 猜你喜欢
走在途中……
1楼 2015-09-25 11:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxb2061: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-09-25 23:38:05
预变性，94°，5min；
变性，94°，1min；
退火，根据你的引物设定温度，1min；
延伸，72°，时间根据酶的扩增速度设定（如1000 bp/min，则1.5min）；
30个循环；
72°，10min；
4°保存。

其实没那么严格，时间也可以变化的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-09-25 11:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cwdy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pcr试剂说明书都会有的，退火温度一般要根据自己的引物来调，延伸时间根据产物大小来调。。
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-25 17:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb2061

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-09-25 11:08:29
预变性，94°，5min；
变性，94°，1min；
退火，根据你的引物设定温度，1min；
延伸，72°，时间根据酶的扩增速度设定（如1000 bp/min，则1.5min）；
30个循环；
72°，10min；
4°保存。

其实没那么严格 ...

根据实验室常规做法，Tm55，目的片段很淡，几乎看不到，非特异性片段很亮，试了试提高温度，最后还是没有P出来，，不知什么原因，同时做了个1841的到是有结果，难道是引物问题？设计时进行检测没看出什么问题啊。求告知，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
走在途中……
4楼2015-09-25 23:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2015-09-26 00:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb2061

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-09-26 00:10:44
可以在Tm两侧做几个梯度
...

听过要做梯度，可否详细介绍下，这个梯度和我不同温度筛选有什么不同
赞一下 回复此楼
走在途中……
6楼2015-09-26 09:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-09-26 11:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
★
wxb2061: 金币+1 2015-10-03 12:00:50
本帖仅楼主可见
赞一下
8楼2015-09-29 11:12:17
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

MarchZR

银虫 (小有名气)
这种问题酶的说明书一般都会有，不过还是有一篇资料，一般PCR的标准操作流程（http://www.detaibio.com/topics/pcr-sop.html）
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-09-29 15:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxb2061 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭