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aust

金虫 (正式写手)

一只老虫

[交流] 求助western blot转膜条件

我有一个17.8KD的蛋白,以前是用半干转的,现在半干转的机器有问题,得用湿转来做,请问有人成功转过类似大小的蛋白吗?给个建议啊!谢谢了!
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sofier

我做过18KD的蛋白,条件是100v 45min,用的是milipore 0.22um的pvdf膜,效果挺不错的。
4楼2008-10-04 10:19:42
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wykzs

铜虫 (初入文坛)

★ ★
aust(金币+2,VIP+0):谢谢!
这种小分子量的蛋白最好用小孔径的膜,我们一般做30KD左右的蛋白,湿转条件是100v,50min,你可以减少转膜时间,另外,在转移缓冲液中最好不要加SDS。这只是我个人的建议,希望对你有所帮助!
2楼2008-09-04 23:22:33
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winony

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
aust(金币+2,VIP+0):谢谢!
200mA
30min
做过更小的,膜的孔径影响不是很大。
转膜液可以只用10X的稀释,好运
3楼2008-09-06 06:27:53
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