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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 求助western blot转膜条件
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aust

金虫 (正式写手)

一只老虫

[交流] 求助western blot转膜条件

我有一个17.8KD的蛋白，以前是用半干转的，现在半干转的机器有问题，得用湿转来做，请问有人成功转过类似大小的蛋白吗？给个建议啊！谢谢了！
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1楼 2008-09-01 16:51:34
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sofier

我做过18KD的蛋白，条件是100v 45min，用的是milipore 0.22um的pvdf膜，效果挺不错的。
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4楼2008-10-04 10:19:42
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wykzs

铜虫 (初入文坛)
★ ★
aust(金币+2,VIP+0):谢谢！
这种小分子量的蛋白最好用小孔径的膜，我们一般做30KD左右的蛋白，湿转条件是100v，50min，你可以减少转膜时间，另外，在转移缓冲液中最好不要加SDS。这只是我个人的建议，希望对你有所帮助！
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2楼2008-09-04 23:22:33
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winony

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
aust(金币+2,VIP+0):谢谢！
200mA
30min
做过更小的，膜的孔径影响不是很大。
转膜液可以只用10X的稀释，好运
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3楼2008-09-06 06:27:53
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