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创制「动脉粥样硬化模型」的方法
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01 高脂、高胆固醇饲料诱导法 高脂饲喂法早在20世纪70年代已被采用，至今仍是模拟AS模型最重要的方法。特点是死亡率低，可长期观察，但费时久 造模机制：动物机体脂质代谢紊乱，血脂升高，容易引起血管内皮损伤，导致血管内皮功能紊乱、通透性增高，最终导致血管壁的脂质浸润、形成动脉粥样硬化。 造模方法：在动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪。（在基础饲料前提下，添加胆固醇、蛋黄、猪油。根据不同实验目的，采用不同配方。） 通常在一定范围内，饲料中胆固醇含量愈高，血浆中胆固醇含量升高亦愈明显，AS病变发生也愈快。但血浆中胆固醇水平与AS的形成和病变程度并非正相关，过高的血浆胆固醇水平常引起动物中毒甚至死亡。 由于啮齿类动物(如小鼠、大鼠）对胆固醇几乎不反应，为了促进病变的形成，在高脂、高胆固醇饲料中可加入胆酸盐、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、苯丙胺、维生素D、烟碱或蔗糖等，可进一步加速动脉病变的形成。 优点：操作简单，成本较低，较符合人类饮食的特点，病理改变与人早期相似。 缺点：造模时间较长，不易形成类似人体的后期粥样斑块病变，期间易导致继发感染从而影响实验的稳定性。 适用于：早期动脉粥样硬化的研究 02 免疫损伤法 AS的发病机制有免疫因素的存在，所以可以从免疫学的角度来建立AS模型，如使用牛血清白蛋白、卵清白蛋白、肺炎衣原体、EB病毒、巨细胞病毒、幽门螺杆菌、内毒素等进行免疫刺激，从而诱发AS的产生。 造模机制：免疫刺激引起动脉粥样硬化斑块形成及sCD40L水平升高，从而引起动脉粥样硬化。 （1）将大鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇、β-脂蛋白及甘油三脂升高。 （2）给兔注射马血清10ml/kg/次，共4次，每次间隔17天，动脉内膜损伤率为88%，冠状动脉亦有粥样硬化的病变；同时给予高胆固醇饲料，病变更加明显。 （3）兔喂饲含1%胆固醇的饮料，静脉注射牛血清白蛋白250mg/kg，可加速高胆固醇饲料引起的动脉内膜病变形成。 优点：建模时间短、成活率高、模型稳定、可控性好。 缺点：所形成的单纯免疫性炎性不能涵盖动脉粥样硬化炎性反应过程，其病理特征也有待进一步观察。 适用于：动脉粥样硬化发病机制的研究 03 血管内皮损伤法 造模机制：通过外力损伤血管内皮细胞，使血管内皮通透性、黏附性、血液凝固改变，造成动脉内膜损伤或功能障碍，再辅助性饲喂高脂、高胆固醇饮食，可诱导动脉粥样硬化形成。 根据不同的外力，血管内皮损伤法可以分为机械损伤法和物理生化因子损伤法。前者主要是用球囊导管、钢丝套圈或金属丝等来损伤血管内皮，而后者则是用化学药品、电刺激、空气干燥或放射线等来损伤血管内皮。 其中球囊损伤法具有可靠性强、可重复性高、更符合临床动脉粥样硬化疾病的发生发展过程等优点。 ▶ 球囊损伤法 方法：将球囊导管插入血管后，将球囊充气，反复进出牵拉3次，以损伤血管内膜。 大鼠：将充满生理盐水的塑料球囊导管自颈外动脉进入胸主动脉，向外拉至颈外动脉再进入胸主动脉，反复3次，再喂以高脂、高胆固醇饮食8周后，可以出现明显动脉粥样硬化病变。 注意：球囊损伤管到达颈总动脉中段后，进行反复牵拉时，用力一定要轻，以防动物意外死亡。 优点：时间短，定位明确，易于评价，并可根据不同的研究目的和动物，选用不同的动脉造模。 缺点：形成的斑块较易脱落而形成血栓，若球囊大小控制不佳会导致动脉破裂或建模失败。 适用于：动脉粥样硬化的用药或转基因治疗实验的研究 ▶ 气体干燥法 方法：空气干燥法是以流量为50-250ml/min的干燥清洁气流吹实验部位的动脉血管内膜5-15min，以造成内膜内皮细胞变性和功能减退，建立动脉粥样硬化模型。 优点：成模时间短，操作柔和，内膜变化更接近自然状态下动脉粥样硬化形成的进程，可控性强，不易损害到血管的其他部位。 缺点：气流吹的部位要相对恒定，不宜过长，时间也要充足，若内皮损伤轻则不能形成动脉粥样硬化。 适用于：动脉粥样硬化内皮细胞作用的研究 04 动脉结扎法 方法：对血管结扎缝合使血管内血流速度和切应力发生改变，建立动脉粥样硬化模型。 优点：对内膜损害小且能保留血管弹性变形的能力。 缺点：需精良的设备，手术操作技术难度大、要求高。 05 基因改造法： 由于鼠具有抗AS性，各种基因敲除和转基因小鼠是近年来的研究热点之一。脂蛋白 E（ApoE）或低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因敲除鼠可自发形成动脉粥样硬化斑块，是动脉粥样硬化研究的常用模型。 优点：能自发产生动脉粥样硬化。 缺点：基因改造小鼠体积小，临床性检查评估很难，与人类脂类代谢差异较大，存在一定的局限性。 适用于：动脉粥样硬化炎症和免疫因子的作用机制研究 06 联合法 高脂喂养造成的动物高脂血症是引起动脉粥样硬化的基础。而各种方法导致内膜损伤，加快了动脉粥样硬化的形成，从而节省造模所需要点时间。 |
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