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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 弱弱问下有没有做过血小板聚集实验的虫友 已有1人参与

请问有没有做过血小板聚集实验的虫友?目前在采用比浊法建立血小板聚集实验体系,在含3X108/mL(A563=0.4)的PRP中加入ADP,A563没有变化。不知道是什么原因。我目前一般是去医院取血,每回用血袋采集大概100mL左右血(血袋中含28mL 枸橼酸钠抗凝剂),大概一个小时回来处理。按照文献中说的以200g-650g的速度离心,上层总是有红细胞,一般再以相同速度第二次离心,使红细胞沉在底部,取上清为PRP。不知道這里面有哪些因素影响血小板不聚集。看文献中都没有第二次离心,难道是PRP中都必须有红细胞才能聚集吗?还是血袋中的抗凝剂含量太高影响了血小板的聚集,抑或是温度有很大的影响?烦请做过相关实验的虫友指点。本人不甚感激。
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lllzm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xieyh07: 金币+5, 有帮助 2015-09-29 09:49:57
没做过实验,只给你理论建议:
枸橼酸是钙离子螯合剂,而ADP导致凝血的机制是需要钙离子内流来介导的~
温度对凝血速度有影响,不过应该不是凝血的问题。
文献里是怎么做的?
2楼2015-09-28 22:20:15
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wdw989

新虫 (正式写手)

低温会激活血小板,现在这个天气还好。取血后最好两小时内测完,不超过三小时。好像你的离心力有点大,不过血小板密度够了应该也没什么大影响

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-28 23:47:41
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lllzm

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xieyh07 at 2015-09-29 09:49:49
文献中写的很简单,都没有加入钙离子...

本身就有,只是不要都螯合掉
8楼2015-09-29 10:52:35
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wdw989

新虫 (正式写手)

转速800-1000,离心力90-120就差不多了。你还是多看看文献吧,血小板聚集是需要钙离子的,你的抗凝剂太多了

发自小木虫Android客户端
10楼2015-09-29 12:11:35
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wdw989

新虫 (正式写手)

我也在设计这方面的实验,还没开始做。一般抗凝剂与血1:9,楼主为何加那么多

发自小木虫Android客户端
3楼2015-09-28 23:45:11
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wdw989 at 2015-09-28 23:45:11
我也在设计这方面的实验,还没开始做。一般抗凝剂与血1:9,楼主为何加那么多

因为在医院直接用取血袋取血,而取血袋中固定有28mL 枸橼酸钠抗凝血剂
5楼2015-09-29 09:48:52
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lllzm at 2015-09-28 22:20:15
没做过实验,只给你理论建议:
枸橼酸是钙离子螯合剂,而ADP导致凝血的机制是需要钙离子内流来介导的~
温度对凝血速度有影响,不过应该不是凝血的问题。
文献里是怎么做的?

文献中写的很简单,都没有加入钙离子
6楼2015-09-29 09:49:49
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wdw989 at 2015-09-28 23:47:41
低温会激活血小板,现在这个天气还好。取血后最好两小时内测完,不超过三小时。好像你的离心力有点大,不过血小板密度够了应该也没什么大影响

请问离心力一般多大比较好,我们现在如果以离心力为200g离心15min,只能取到很少部分的PRP,而且其中还有很多红细胞。不知道红细胞对凝血发挥什么作用,凝血的时候需不需要红细胞。
7楼2015-09-29 09:54:32
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lllzm

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xieyh07 at 2015-09-29 09:54:32
请问离心力一般多大比较好,我们现在如果以离心力为200g离心15min,只能取到很少部分的PRP,而且其中还有很多红细胞。不知道红细胞对凝血发挥什么作用,凝血的时候需不需要红细胞。...

不需要
9楼2015-09-29 10:54:12
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