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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 弱弱问下有没有做过血小板聚集实验的虫友
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 弱弱问下有没有做过血小板聚集实验的虫友 已有1人参与

请问有没有做过血小板聚集实验的虫友？目前在采用比浊法建立血小板聚集实验体系，在含3X108/mL（A563=0.4）的PRP中加入ADP，A563没有变化。不知道是什么原因。我目前一般是去医院取血，每回用血袋采集大概100mL左右血（血袋中含28mL 枸橼酸钠抗凝剂），大概一个小时回来处理。按照文献中说的以200g-650g的速度离心，上层总是有红细胞，一般再以相同速度第二次离心，使红细胞沉在底部，取上清为PRP。不知道這里面有哪些因素影响血小板不聚集。看文献中都没有第二次离心，难道是PRP中都必须有红细胞才能聚集吗？还是血袋中的抗凝剂含量太高影响了血小板的聚集，抑或是温度有很大的影响？烦请做过相关实验的虫友指点。本人不甚感激。
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1楼 2015-09-24 17:38:43
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lllzm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xieyh07: 金币+5, ★有帮助 2015-09-29 09:49:57
没做过实验，只给你理论建议：
枸橼酸是钙离子螯合剂，而ADP导致凝血的机制是需要钙离子内流来介导的~
温度对凝血速度有影响，不过应该不是凝血的问题。
文献里是怎么做的？
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2楼2015-09-28 22:20:15
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wdw989

新虫 (正式写手)
低温会激活血小板，现在这个天气还好。取血后最好两小时内测完，不超过三小时。好像你的离心力有点大，不过血小板密度够了应该也没什么大影响

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4楼2015-09-28 23:47:41
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lllzm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xieyh07 at 2015-09-29 09:49:49
文献中写的很简单，都没有加入钙离子...

本身就有，只是不要都螯合掉
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8楼2015-09-29 10:52:35
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wdw989

新虫 (正式写手)
转速800-1000，离心力90-120就差不多了。你还是多看看文献吧，血小板聚集是需要钙离子的，你的抗凝剂太多了

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10楼2015-09-29 12:11:35
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普通回帖

wdw989

新虫 (正式写手)
我也在设计这方面的实验，还没开始做。一般抗凝剂与血1:9，楼主为何加那么多

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3楼2015-09-28 23:45:11
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)
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3楼: Originally posted by wdw989 at 2015-09-28 23:45:11
我也在设计这方面的实验，还没开始做。一般抗凝剂与血1:9，楼主为何加那么多

因为在医院直接用取血袋取血，而取血袋中固定有28mL 枸橼酸钠抗凝血剂
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5楼2015-09-29 09:48:52
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lllzm at 2015-09-28 22:20:15
没做过实验，只给你理论建议：
枸橼酸是钙离子螯合剂，而ADP导致凝血的机制是需要钙离子内流来介导的~
温度对凝血速度有影响，不过应该不是凝血的问题。
文献里是怎么做的？

文献中写的很简单，都没有加入钙离子
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6楼2015-09-29 09:49:49
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xieyh07

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wdw989 at 2015-09-28 23:47:41
低温会激活血小板，现在这个天气还好。取血后最好两小时内测完，不超过三小时。好像你的离心力有点大，不过血小板密度够了应该也没什么大影响

请问离心力一般多大比较好，我们现在如果以离心力为200g离心15min，只能取到很少部分的PRP，而且其中还有很多红细胞。不知道红细胞对凝血发挥什么作用，凝血的时候需不需要红细胞。
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7楼2015-09-29 09:54:32
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lllzm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xieyh07 at 2015-09-29 09:54:32
请问离心力一般多大比较好，我们现在如果以离心力为200g离心15min，只能取到很少部分的PRP，而且其中还有很多红细胞。不知道红细胞对凝血发挥什么作用，凝血的时候需不需要红细胞。...

不需要
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9楼2015-09-29 10:54:12
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