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tzhadm

新虫 (初入文坛)

[求助] 非融合表达 已有1人参与

非融合表达什么特点?表达量高吗?可以用这种方式亲和层析纯化出蛋白吗?新人求助!

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高gaoeryang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-09-23 22:47:44
1,融合蛋白有两种不同的含义,一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白。狭义的可以看成一段目的基因加上一段筛选标记(如抗性基因、组氨酸标签、GFP等)帮助你进行后续对蛋白进行纯化检测等。而非融合蛋白就是反过来理解。
2,非融合表达出的蛋白就是你要的蛋白,没有附加的东西。
3,表达量得看你的宿主菌。
4,亲和层析纯化一般用于带标签的蛋白,你是非融合表达,就只能根据的的蛋白性质进行纯化,像pH/大小等,用离子交换层析和凝胶排阻等。
2楼2015-09-23 16:53:21
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tzhadm

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 高gaoeryang at 2015-09-23 16:53:21
1,融合蛋白有两种不同的含义,一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白。狭义的可以看成一段目的基因加上一段筛选标记(如抗性基因、组氨酸标签、GFP ...

谢谢,那什么情况下是融合表达,什么情况是非融合表达呢?

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3楼2015-09-23 20:44:32
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高gaoeryang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tzhadm at 2015-09-23 20:44:32
谢谢,那什么情况下是融合表达,什么情况是非融合表达呢?
...

一般做功能研究都用融合表达,条件成熟好纯化蛋白。加个HIS标签、GFP啦。(研究类)
做药或者动物实验,就非融合表达。融合表达牵涉到申报注射之类的麻烦。 (产品类)

新手先用融合表达练练手,加标记有助于你每一步实验都可以定位检测之类的
4楼2015-09-24 11:26:56
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tzhadm

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 高gaoeryang at 2015-09-24 11:26:56
一般做功能研究都用融合表达,条件成熟好纯化蛋白。加个HIS标签、GFP啦。(研究类)
做药或者动物实验,就非融合表达。融合表达牵涉到申报注射之类的麻烦。 (产品类)

新手先用融合表达练练手,加标记有助于你 ...

好的!谢谢您!

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5楼2015-09-24 17:15:41
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