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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cuicuixxl

[交流] 求助(关于测序)

请教高手:我做的是细菌16sRDNA的鉴定,由于样比较多,没有做克隆,直接送的是PCR产物到上海英俊去测,但老是说我的信号不好,或是信号弱,请高手帮忙分析一下嘛,我都重复做了三次了,我的师兄用同样的方法都测出来了的
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cuicuixxl

谢谢各位,我的反应程序为
94度 5min
94度变性40s
54度退火40s
72度延伸1min
72度延伸7min
30个循环.
我每次都跑了电泳的,条带还可以,但三次都测不出来?
7楼2008-09-01 14:52:54
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cuicuixxl

金币不多,吐血求助
2楼2008-09-01 00:21:26
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yat

金虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
不知道你的电泳检测结果中条带是否很亮,是否有拖尾现象。
我觉得可能是你的酶保真性、稳定性不好,建议换一种酶试试。有时候同一种酶不同批次质量也不一样。
不知道你的退火温度是多少。另外退火温度再适当调一下。在理论值内,温度高一些,特异性也会强一些。
Good luck
做最好的自己,永不放弃!
3楼2008-09-01 06:31:18
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
有两个可能,一个是你的pcr产物不纯,一个是测序公司出了问题,所以要么你重新pcr,或者先装下T载体,要么换公司测序
4楼2008-09-01 11:45:23
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