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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 学术交流区 » 论文投稿 » 交流 » 谁用过荧光素酶瞬时表达载体，万分感谢万能的虫友们
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宙斯1111

木虫 (著名写手)

[求助] 谁用过荧光素酶瞬时表达载体，万分感谢万能的虫友们 已有1人参与

就是这两个载体： pGreenII 0800-LUC vector
pGreenII 0029 62-SK vector
谁用过啊？求帮忙，必有重谢~
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不为失败找理由，要为成功找方法
1楼 2015-09-22 20:45:48
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
你好，我也刚拿到这个系统，对他的应用还不了解。不知道这个系统是否适用于转录抑制验证，证明我的蛋白能够抑制目标启动子的活性。
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宙斯1111
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
3楼2016-12-04 12:00:54
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
For promoter activity assay, the MaLBD promoter region
was amplified by PCR using the specific primers listed in
Supplementary Table S1. The PCR product was inserted into
the pGreenII 0800-LUC double reporter vector (Hellens et al.
2005) at the HindIII and BamHI sites to fuse it with the Firefly
luciferase (LUC) reporter gene (MaLBDs pro-LUC); a Renilla
(REN) luciferase under the control of the 35S promoter at the
same vector was used as a positive control. The construct
CaMV35S-REN/MaLBDs pro-LUC was transformed into tobacco
BY-2 protoplasts by polyethylene glycol (PEG)
methods as described previously (Abel and Theologis 1994).
The promoter activity is indicated by the ratio of LUC to REN.
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
4楼2016-12-04 12:02:43
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
Transient Assay in Protoplast
A dual luciferase assay was performed in the transient assay.
For transactivation analysis of MaLBDs, the coding sequence
of MaLBDs without the stop codon was cloned into the
reconstructed GAL4DBD vector as effector. The double reporter
vector includes a GAL4-LUC and a internal control
REN driven by the 35S promoter. GAL4-LUC contains five
copies of GAL4-binding element and minimal TATA region
of the 35S promoter of CaMV, and these sequences are located
upstream of the LUC.
For the assay of the binding activity of MaLBDs to the
MaEXPs promoter, two pGreenII vectors, pGreenII 0800-
LUC reporter vector and pGreenII 0029 62-SK effector vector,
were used (Hellens et al. 2005). The MaEXPs promoter
was cloned into pGreen 0800 at the HindIII and BamHI sites
to fuse it with the LUC reporter gene (MaEXPs pro-LUC).
MaLBDs were cloned into the pGreenII 62-SK vector. The
pGreenII 0800-LUC vector carried a REN under the control of
the 35S promoter as a positive control.
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
5楼2016-12-04 12:03:13
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宙斯1111

木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2016-12-04 12:00:54
你好，我也刚拿到这个系统，对他的应用还不了解。不知道这个系统是否适用于转录抑制验证，证明我的蛋白能够抑制目标启动子的活性。

好久没来了，刚看到
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不为失败找理由，要为成功找方法
6楼2017-01-09 09:43:35
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