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雨儿天0320管理员
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[求助]
基因克隆、转化 已有1人参与
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大侠们： 我最近在做动物基因组片段连接、转化到大肠杆菌质粒中，然后进行测序工作。 由于原来不是做分子克隆相关实验的，因此，针对转化步骤，我有些疑问，想想请教大家，谢谢！ 1. 我采用的是试剂盒转化步骤，按照说明进行连接时，须在16度循环水浴中进行连接反应，这个还有些资料上说早4度，连接过夜，请问这个是不是和连接酶有关系，连接酶有很多不同的种类吗？ 2. 转化时，通常所说的在碎冰上进行一段时间，然后再进行热激，请问这些反应条件本质上是什么作用？ 3. 在进行电泳验证时，照胶完成后，图片下方(跑电泳时，最后的的边界处)，经常会出现一条极重的阴暗带，而且还掩盖了DNA Maker的最小的条带，请问和凝胶的浓度、薄厚或核酸染色剂有关吗？ 谢谢  |
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