| 查看: 4254 | 回复: 56 | |||
lwmhxy木虫 (初入文坛)
|
[交流]
1700bp目的片段连不上pCAMBIA2301表达载体
|
| RT，我的目的片段大概1700bp，2301载体11000bp左右，可选的酶切位点为BamH I和 KpnI，双酶切，连接之后转化DH5α，过夜之后平板没长菌，已经做了2次，双酶切我是先30℃切2小时，再37℃切2小时，目的片段从T载体上切开了，载体是否双酶切开，我不确定，第三次我又重新做了一次，我先30度酶切，回收纯化之后再37度切，还是没连接上，板子还是没长菌。这2个酶切位点离得太近，是否没有双酶切开，导致目的片段没连上，培养基和抗生素Kan+都没问题。请问大家怎么办？？？连接体系目的13μl，2301载体3μl，T4buffer 2μl，T4连接酶1μl，ddH2O 1μl，16度10个小时，回收之后我也检测了，条带还可以，请问是为什么？？是不是BamH I和 KpnI这两个酶的酶切位点太相似，一个是GGATCC ，一个是GGTACC的原因？？？？？ |
回复此楼» 猜你喜欢
本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以
已经有6人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有9人回复
-
085602 化工专硕 338分 求调剂
已经有11人回复
-
070305高分子化学与物理 304分求调剂
已经有4人回复
-
一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京工业大学，324分求调剂
已经有4人回复
-
320分，材料与化工专业，求调剂
已经有13人回复
-
学硕274求调剂
已经有7人回复
-
085600，材料与化工321分求调剂
已经有9人回复
-
求调剂
已经有4人回复
lwmhxy
木虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3549.2
- 散金: 47
- 帖子: 33
- 在线: 28.3小时
- 虫号: 2476861
- 注册: 2013-05-22
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2015-09-22 10:32:38
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2015-09-22 10:47:46
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
 |
4楼2015-09-22 10:57:14
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
|
|
5楼2015-09-22 11:09:29
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
|
|
6楼2015-09-22 11:12:03
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
|
|
7楼2015-09-22 11:21:03
xiaochong8693
木虫之王 (文坛精英)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 74351.8
- 散金: 3788
- 红花: 233
- 帖子: 47068
- 在线: 2659.7小时
- 虫号: 752823
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 动物学
8楼2015-09-22 11:31:13
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
|
|
9楼2015-09-22 11:35:51
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
|
|
10楼2015-09-22 11:36:10
