| 查看: 4319 | 回复: 56 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lwmhxy木虫 (初入文坛)
|
[交流]
1700bp目的片段连不上pCAMBIA2301表达载体
|
||
| RT，我的目的片段大概1700bp，2301载体11000bp左右，可选的酶切位点为BamH I和 KpnI，双酶切，连接之后转化DH5α，过夜之后平板没长菌，已经做了2次，双酶切我是先30℃切2小时，再37℃切2小时，目的片段从T载体上切开了，载体是否双酶切开，我不确定，第三次我又重新做了一次，我先30度酶切，回收纯化之后再37度切，还是没连接上，板子还是没长菌。这2个酶切位点离得太近，是否没有双酶切开，导致目的片段没连上，培养基和抗生素Kan+都没问题。请问大家怎么办？？？连接体系目的13μl，2301载体3μl，T4buffer 2μl，T4连接酶1μl，ddH2O 1μl，16度10个小时，回收之后我也检测了，条带还可以，请问是为什么？？是不是BamH I和 KpnI这两个酶的酶切位点太相似，一个是GGATCC ，一个是GGTACC的原因？？？？？ |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有4人回复
-
0854求调剂
已经有27人回复
-
材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组
已经有27人回复
-
300求调剂
已经有12人回复
-
291求调剂
已经有10人回复
-
一志愿沪9，326求生物学调剂
已经有12人回复
-
生物学调剂
已经有10人回复
-
320求调剂
已经有5人回复
-
接受任何调剂
已经有7人回复
-
化学070300 求调剂
已经有29人回复
32楼2015-09-22 13:12:26
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2015-09-22 10:47:46
★
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
lwmhxy(金币+1): 谢谢参与
 |
5楼2015-09-22 11:09:29
xiaochong8693
木虫之王 (文坛精英)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 74356.8
- 散金: 3788
- 红花: 233
- 帖子: 47069
- 在线: 2659.7小时
- 虫号: 752823
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 动物学
8楼2015-09-22 11:31:13
20