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[求助]
t4连接时间过长 有影响嘛？导致转化失败了 已有1人参与
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| 在转化，使用pqe和pet28a做载体，目的片段1000bp，主要是pqe的问题，用neb双酶切，酶切后纯化质粒浓度 6.7ng/ul，目的片段33ng/ul，按照1:5连接，16摄氏度连接15小时，之后有事情导致人不在，25度连接了4h左右，觉得t4连接时间长点也不怕，也没听说会激活外切酶，所以长时间t4连接应该蛮安全，但是转化没长菌… 操作没什么问题 之前都是这样做的。酶切和连接不知道哪个环节有问题，酶切的话 neb蛮靠谱的。应该是都切开了，不然板上会长克隆出来的。还有我会习惯转化是按12:50加重组液和感受态。向大神求助啊！ |
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