24小时热门版块排行榜    

查看: 217  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题,作者fortunate1将赠送您 4 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fortunate1

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增+【有效期至2008.9.7】

我在做PCR扩增时,扩增的电泳图只有二聚体并且二聚体的条带很亮,没有其它任何条带,是什么原因那?我想扩增的目的条带是1500bp左右,我设计的上游引物的Tm值是66.6,下游引物的Tm值是55,设定的退火温度是54度,延伸时间是1分30秒。请各位前辈指教,多谢!

[ Last edited by fortunate1 on 2008-9-6 at 21:34 ]

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwlcxx

银虫 (小有名气)


fortunate1(金币+1,VIP+0):非常感谢,谢谢你
建议退火温度更改为58-60度之间的值,提高Mg2+浓度,以提高扩增的特异性。考虑降低引物的量,和增加模板量。
4楼2008-09-01 17:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

ant5002

可能是 延伸时间不够吧!  其实我也不太清楚的!  呵呵!
2楼2008-08-31 10:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjunem

至尊木虫 (职业作家)

建议适用高保真Taq酶,保证DNA模板没问题,延伸时间要延长
3楼2008-08-31 10:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

可能的原因可能是多方面的

除了上述大家说的建议
另外建议看看引物的设计是否有问题?
不知道你的模板是什么,你能确信扩增到的是二聚体而不是别的序列吗?可以测个序,或者做个酶切验证一下。
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2008-09-04 13:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 12/600 2026-03-20 20:47 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 14/700 2026-03-20 09:30 by kkcoco25
[考研] 271材料工程求调剂 +7 .6lL 2026-03-18 7/350 2026-03-20 09:10 by xingguangj
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +3 sbdksD 2026-03-19 3/150 2026-03-19 23:21 by fmesaito
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
请填处理意见