24小时热门版块排行榜    

查看: 298  |  回复: 5
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题,作者fortunate1将赠送您 4 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fortunate1

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增+【有效期至2008.9.7】

我在做PCR扩增时,扩增的电泳图只有二聚体并且二聚体的条带很亮,没有其它任何条带,是什么原因那?我想扩增的目的条带是1500bp左右,我设计的上游引物的Tm值是66.6,下游引物的Tm值是55,设定的退火温度是54度,延伸时间是1分30秒。请各位前辈指教,多谢!

[ Last edited by fortunate1 on 2008-9-6 at 21:34 ]
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwlcxx

银虫 (小有名气)


fortunate1(金币+1,VIP+0):非常感谢,谢谢你
建议退火温度更改为58-60度之间的值,提高Mg2+浓度,以提高扩增的特异性。考虑降低引物的量,和增加模板量。
4楼2008-09-01 17:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

ant5002

可能是 延伸时间不够吧!  其实我也不太清楚的!  呵呵!
2楼2008-08-31 10:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjunem

至尊木虫 (职业作家)

建议适用高保真Taq酶,保证DNA模板没问题,延伸时间要延长
3楼2008-08-31 10:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

可能的原因可能是多方面的

除了上述大家说的建议
另外建议看看引物的设计是否有问题?
不知道你的模板是什么,你能确信扩增到的是二聚体而不是别的序列吗?可以测个序,或者做个酶切验证一下。
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
5楼2008-09-04 13:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:52 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
信息提示
请填处理意见